脊髓單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白在急、慢性炎性痛中的作用及機制探討.pdf

1、第一部分脊髓單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2在急性炎性痛中的作用
　　目的:觀察小鼠急性炎性痛時脊髓單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2表達的變化，確定其在急性炎性疼痛中的作用。
　　方法:(1)實驗分組:正常對照組（A組）;生理鹽水組（B組）;4-CIN組（C組）和二甲基亞砜(DMSO)組（D組）。(2)小鼠足底注射福爾馬林建立急性炎性疼痛模型;(3)建立模型前各組小鼠分別鞘內(nèi)注射人工腦脊液、MCT-2抑制劑α-氰基-4-羥基肉桂酸（4-CIN）及溶媒DMS

2、O;(4)觀察各組小鼠Ⅰ、Ⅱ時相舔咬足時間，并對其進行疼痛評分;(5) Western blot檢測各組小鼠脊髓MCT-2的改變。
　　結(jié)果:(1)小鼠急性炎性痛模型建立后，與A組比較，B組小鼠在Ⅰ、Ⅱ時相出現(xiàn)明顯的舔咬足行為，疼痛評分明顯增高;與B組比較，C組舔咬足時間明顯縮短，疼痛評分明顯降低。(2)免疫印跡結(jié)果顯示，B組脊髓MCT-2的表達明顯增多(P＜0.05);而與B組和D組相比，C組脊髓MCT-2的表達明顯減少(P＜0

3、.05);B、D兩組疼痛評分和脊髓MCT-2的表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:MCT-2在急性炎性痛時存在與小鼠痛行為相關(guān)的變化，鞘內(nèi)注射MCT-2的抑制劑4-CIN可緩解福爾馬林所致小鼠的急性炎性疼痛。由此可見，脊髓MCT-2在急性炎性痛過程中發(fā)揮作用。
　　第二部分慢性炎性痛大鼠脊髓背角MCT-2、MCT-1及MCT-4表達變化
　　目的:觀察慢性炎性痛大鼠脊髓背角MCT-2、MCT-1及MCT-4表達的變化，探

4、討其在慢性炎性痛中的可能作用。
　　方法:(1)建立大鼠慢性炎性疼痛模型;(2)運用von Frey纖維絲檢測各組大鼠足底注射CFA后機械性縮足閾值的改變;(3)運用Hargreaves熱輻射法檢測各組大鼠足底注射CFA后熱縮足潛伏期的改變;(4)免疫熒光組織化學方法檢測脊髓背角星形膠質(zhì)細胞MCT-2的表達變化;(5)Western blot檢測各組大鼠脊髓背角MCT-2、MCT-1和MCT-4的改變;
　　結(jié)果:CFA組大

5、鼠在注射CFA后3h即出現(xiàn)痛覺過敏，并持續(xù)至第14天，其疼痛程度顯著大于NS組（P＜0.05）;且T1-6時脊髓背角MCT-2與NS組相比顯著增加(P＜0.05)。大鼠脊髓背角MCT-2的表達與痛行為學的改變（PMWT和PWTL）相關(guān)(P＜0.05，P＜0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示脊髓背角神經(jīng)元MCT-2的表達明顯增加;Western blot結(jié)果顯示，MCT-1和MCT-4的表達類似于MCT-2.
　　結(jié)論:在大鼠慢性炎性痛過程

6、中，脊髓背角神經(jīng)元上MCT-2、星形膠質(zhì)細胞及血管膜上的MCT-1和MCT-4均存在變化，其與痛行為學表現(xiàn)明顯相關(guān)，其均可能參與慢性炎性痛的形成和維持。
　　第三部分脊髓背角單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2對ERK的影響及機制探討
　　目的:通過檢測MCT-2的變化對脊髓背角p-ERK的影響，初步探討脊髓背角MCT-2參與調(diào)控慢性炎性痛的可能機制。
　　方法:(1)建立大鼠慢性炎性疼痛模型;(2)B、C和D組大鼠左足底皮下注射CFA前

7、1h分別鞘內(nèi)注射人工腦脊液、4-CIN和DMSO;A組左側(cè)足底皮下注射等量生理鹽水;(3)運用von Frey纖維絲檢測各組大鼠足底注射CFA后機械性縮足閾值的改變;(4)運用Hargreaves熱輻射法檢測各組大鼠足底注射CFA后熱縮足潛伏期的改變;(5) Western blot檢測各組大鼠脊髓背角MCT-2和p-ERK表達的變化。
　　結(jié)果:各組術(shù)前PMWT和PWTL差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與A組相比，B組PWMT

8、和PWTL明顯降低(P＜0.05);Western blot結(jié)果顯示，脊髓背角MCT-2及p-ERK表達明顯增加(P＜0.05)。與B組比較，C組在給藥后PWT和PWL明顯延長(P＞0.05)，同時Western blot結(jié)果顯示，C組脊髓背角MCT-2及p-ERK表達也明顯下調(diào)。D組PWMT和PWTL與B組相比無差異，D組大鼠脊髓背角MCT-2及p-ERK表達同B組相比亦無差異。
　　結(jié)論:在大鼠慢性炎性痛發(fā)生、發(fā)展過程中脊髓背