脊髓膠質(zhì)細(xì)胞及前炎性細(xì)胞因子在骨癌痛中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的: 探討脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞以及前炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）在骨癌痛發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制。 方法: （1）通過(guò)大鼠脛骨內(nèi)注射高度骨轉(zhuǎn)移傾向的同源的MADB-106乳腺癌細(xì)胞建立骨轉(zhuǎn)移癌痛模型，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步采用免疫組織化學(xué)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 以及逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等方法，觀察脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的活性以及前炎性細(xì)胞因子I

2、L-1β及TNF-α的變化與大鼠脛骨破壞、疼痛行為改變的關(guān)系。 （2）在這種模型的基礎(chǔ)上，鞘內(nèi)給予P38MAPK抑制劑SB203580，通過(guò)測(cè)定大鼠的機(jī)械性痛覺(jué)超敏（PWT）和熱感覺(jué)過(guò)敏（PWL）觀察P38MAPK抑制劑抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活性后對(duì)大鼠疼痛行為的改變。 （3）在骨癌痛模型基礎(chǔ)上制備嗎啡耐受模型，采用免疫組織化學(xué)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 以及逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等方法，觀察脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的活

3、性及前炎性細(xì)胞因子與骨癌痛嗎啡耐受的關(guān)系。 （4）制備骨癌痛模型后通過(guò)放射治療阻止脛骨進(jìn)一步癌性破壞，應(yīng)用Tunel染色法了解脛骨內(nèi)腫瘤細(xì)胞的凋亡情況，測(cè)定大鼠的機(jī)械性痛覺(jué)超敏（PWT）和熱感覺(jué)過(guò)敏（PWL）觀察大鼠疼痛行為的改變，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 以及逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等方法了解脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活性及前炎性細(xì)胞因子的改變。 結(jié)果: （1）大鼠脛骨內(nèi)注射MADB-106細(xì)胞后，隨著脛骨破

4、壞的進(jìn)行性加重，同時(shí)伴隨出現(xiàn)進(jìn)行性下降的PWT和PWL值；隨著時(shí)間進(jìn)程，免疫組化顯示注射腫瘤細(xì)胞同側(cè)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞依次活化，小膠質(zhì)細(xì)胞活化開(kāi)始于注射腫瘤細(xì)胞后第8天，星形膠質(zhì)細(xì)胞活化開(kāi)始于注射腫瘤細(xì)胞后第14天。注射腫瘤細(xì)胞同側(cè)脊髓IL-1β和TNF-α mRNA表達(dá)和蛋白含量均明顯增加，P﹤0.05。 （2）脛骨X線及組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，鞘內(nèi)注射SB203580對(duì)脛骨癌性破壞程度及腫瘤的生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，但注射SB20

5、3580后，給藥組大鼠左側(cè)PWL值顯著高于對(duì)照組，P﹤0.05；左側(cè)脊髓內(nèi)IL-1β和TNF-αmRNA表達(dá)減少、蛋白含量較對(duì)照組降低（P﹤0.05）。 （3）骨癌痛模型造模后14天，對(duì)照組PWL及PWT比術(shù)前降低，P<0.05；嗎啡耐受組14、16、18天PWL及PWT值均高于對(duì)照組，P<0.05，第19天兩組大鼠均給予小劑量的嗎啡，對(duì)照組大鼠PWL及PWT值明顯增加，而嗎啡耐受組改善不明顯。第20天，嗎啡耐受組大鼠左側(cè)脊髓的

6、IL-1β和TNF-α mRNA的表達(dá)比對(duì)照組高，P<0.05；嗎啡耐受組大鼠相應(yīng)節(jié)段脊髓IL-1β和TNF-α蛋白的相對(duì)含量與對(duì)照組比較明顯增加，P<0.05；嗎啡耐受組大鼠左側(cè)脊髓GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞和OX-42陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞的光密度與右側(cè)的比值與對(duì)照組比較明顯增加，P<0.05。 （4）放射治療后大鼠PWL及PWT值明顯高于模型對(duì)照組，P<0.05。X線檢測(cè)顯示放射治療組脛骨骨質(zhì)破壞程度明顯輕于模型對(duì)照組。Tune

7、l染色檢查發(fā)現(xiàn)放射治療組腫瘤細(xì)胞凋亡明顯多于模型對(duì)照組，P<0.001。同時(shí)，脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞活性標(biāo)志物GFAP和小膠質(zhì)細(xì)胞活性標(biāo)志物OX-42的mRNA表達(dá)較模型對(duì)照組明顯下降，P<0.05，前炎性細(xì)胞因子IL-1β及TNF-α的mRNA的表達(dá)及蛋白含量與模型對(duì)照組相比明顯降低，P<0.05。 結(jié)論: 大鼠脛骨內(nèi)注射MADB-106乳腺癌細(xì)胞成功的建立了骨轉(zhuǎn)移癌痛模型，骨腫瘤誘發(fā)的脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活化及前炎性細(xì)胞因子IL-1β和T