擬失重對(duì)大鼠腎上腺髓質(zhì)激素分泌及miRNA-375表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景和目的：失重是指物體在環(huán)境中有質(zhì)量而不表現(xiàn)重量的狀態(tài)。航天員在太空工作過程中受到的失重環(huán)境對(duì)人體肌肉骨骼、血液及心血管等系統(tǒng)都會(huì)產(chǎn)生影響。近年來，隨著航天事業(yè)的飛速發(fā)展，失重環(huán)境對(duì)心血管及內(nèi)分泌系統(tǒng)影響的機(jī)理探討和深入研究再度成為熱點(diǎn)問題。Morey-Holton尾部懸吊模型是目前常用的以動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的模擬失重模型。本實(shí)驗(yàn)利用該模型來研究模擬失重環(huán)境下大鼠腎上腺中髓質(zhì)激素的分泌及miRNA-375的表達(dá)情況。
　　研究方

2、法：選取SPF級(jí)成年雄性健康Wistar大鼠56只進(jìn)行尾懸吊模擬失重實(shí)驗(yàn)，根據(jù)尾懸吊時(shí)間不同分為6h、12h、1d、3d、5d、7d及0d（對(duì)照）共七組（n=8），實(shí)驗(yàn)結(jié)束后觀察各組大鼠體重變化和腎上腺重量變化，HE染色觀察腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，電子顯微鏡技術(shù)觀察腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，放射性免疫法測定血漿中去甲腎上腺素（NE）、腎上腺素（E）和多巴胺（DA）含量，免疫組織化學(xué)法觀察髓質(zhì)細(xì)胞內(nèi)酪氨酸羥化酶（TH）蛋白表達(dá)，Wes

3、tern-blot技術(shù)檢測腎上腺TH和多巴胺β-脫氫酶（DBH）表達(dá)，熒光實(shí)時(shí)定量PCR法測定腎上腺TH mRNA、DBH mRNA和miRNA-375表達(dá)。
　　結(jié)果：懸吊組大鼠懸吊12 h后體重顯著低于未懸吊組大鼠（P<0.05），懸吊5 d和7 d后體重也明顯低于未懸吊組（P<0.05）；光鏡下可見懸吊3 d組大鼠髓質(zhì)內(nèi)血竇擴(kuò)張，淤血癥狀明顯，但細(xì)胞形態(tài)未見明顯改變；電鏡下可見懸吊12 h和1d組髓質(zhì)細(xì)胞內(nèi)線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

4、、高爾基復(fù)合體等細(xì)胞器數(shù)目開始增多，懸吊3d組髓質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的線粒體腫脹明顯，懸吊7d組線粒體嵴開始出現(xiàn)溶解現(xiàn)象；尾懸吊模擬失重條件下大鼠血漿腎上腺髓質(zhì)激素波動(dòng)明顯，6 h~12 h出現(xiàn)一過性下降，隨后急劇升高，3 d時(shí)形成峰值。RT-PCR結(jié)果顯示，各組大鼠腎上腺組織TH mRNA表達(dá)波動(dòng)明顯，6 h時(shí)呈現(xiàn)一過性下降，隨即上升，1 d時(shí)達(dá)峰值，之后呈下降趨勢，5 d時(shí)形成谷值。大鼠腎上腺髓質(zhì)TH蛋白表達(dá)以尾懸吊3 d時(shí)染色最強(qiáng)。腎上腺髓質(zhì)

5、中miRNA-375表達(dá)表現(xiàn)為尾懸吊早期（6 h）呈一過性顯著升高，隨后快速下降，12h、1d和3d時(shí)的表達(dá)受到明顯抑制，表達(dá)量顯著下降，5 d時(shí)表達(dá)量增加，7 d時(shí)顯著升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)模擬失重環(huán)境中腎上腺髓質(zhì)形態(tài)和功能及miRNA-375表達(dá)變化進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，模擬失重環(huán)境可造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重下降，并引起機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)和腎上腺髓質(zhì)激素分泌合成變化。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-375在模擬失重