中藥腎絡(luò)通對腎間質(zhì)纖維化大鼠腎上腺髓質(zhì)素及其受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化(tubulointerstitialfibrosis，TIF)是各種原因所致腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎功能衰竭的共同病理特征Ⅲ。細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)合成和降解失衡，造成大量積聚是引起腎間質(zhì)纖維化的主要原因[2]。所以尋找具有多種治療作用，在不同途徑和階段拮抗腎間質(zhì)纖維化形成，無毒或低毒的安全藥物對腎臟疾病的治療有很大的意義。腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin，ADM)是一種

2、新的舒血管活性肽類。近期研究表明ADM具有抑制TGFβ1(transforminggrowthfactor-β1、TGFβ1)刺激膠原合成和分泌的作用。 腎絡(luò)通是趙玉庸教授在臨床上用治慢性腎病的基本方，動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該方可以調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的沉積降解，但是否通過ADM途徑發(fā)揮作用尚缺乏證據(jù)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用腎絡(luò)通對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(unilateralureteralobstruction，UUO)誘導(dǎo)的腎間質(zhì)纖維化大鼠模型進(jìn)行干預(yù)性治療

3、并以血管緊張素受體拮抗劑纈沙坦(Valsartan)為對照，旨在通過觀察腎絡(luò)通對實(shí)驗(yàn)動物梗阻側(cè)腎臟組織形態(tài)學(xué)及轉(zhuǎn)化生長因子β1、Ⅲ型膠原(collagenⅢ，ColⅢ)、ADM及其受體的影響，探討中藥復(fù)方—腎絡(luò)通對腎間質(zhì)纖維化的拮抗作用及作用機(jī)理。 方法：本實(shí)驗(yàn)研究選用雌性SD大鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，分別置代謝籠里取尿，測定尿蛋白及尿紅細(xì)胞全部陰性，隨機(jī)分為4組，假手術(shù)組(Shamgroup)、模型組(UUOgroup)、

4、纈沙坦組(UUOVgroup)、腎絡(luò)通組(UUOSgroup)，每組10只，除假手術(shù)組外，各組動物結(jié)扎左側(cè)輸尿管并在術(shù)前一天灌胃給藥，假手術(shù)組與模型組分別灌入等量的生理鹽水，于實(shí)驗(yàn)第21天全部殺檢，取左側(cè)腎臟進(jìn)行病理學(xué)觀察，并分別采用免疫組化及原位雜交方法檢測TGFβ1、ColⅢ、ADM及其受體在蛋白及基因水平的表達(dá)。 結(jié)果：①腎組織HE及Masson染色顯示：模型組間質(zhì)大量炎細(xì)胞浸潤和纖維組織增生，腎小管部分萎縮、管腔閉塞或擴(kuò)

5、張，腎小球數(shù)目明顯減少，面積縮小。腎小囊粘連或擴(kuò)張，小囊周圍大量纖維組織增生。各治療組間質(zhì)可見多少不等的炎細(xì)胞浸潤，少量纖維組織增生，腎小管輕度擴(kuò)張，部分腎小球輕度萎縮，小囊擴(kuò)張，腎小球數(shù)量無明顯改變。圖像分析顯示：模型組腎間質(zhì)纖維化程度較重；纈沙坦組、腎絡(luò)通組與模型組比較，腎間質(zhì)纖維化面積明顯減少(P＜0.05，P＜0.01)，提示腎絡(luò)通及纈沙坦均有拮抗腎間質(zhì)纖維化的作用。其中，腎絡(luò)通組優(yōu)于纈沙坦組，但均無顯著性差異(P＞0.05)；

6、②ColⅢ蛋白的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：ColⅢ主要表達(dá)于腎間質(zhì)。假手術(shù)組大鼠腎間質(zhì)ColⅢ呈弱陽性表達(dá)，其余各組表達(dá)顯著增強(qiáng)，為條索狀或成片塊狀。其中，模型組與假手術(shù)組相比ColⅢ的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)；纈沙坦組、腎絡(luò)通組與模型組相比，ColⅢ的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性下降(P＜0.05，P＜0.01)，提示腎絡(luò)通、纈沙坦均可抑制梗阻側(cè)腎組織中ColⅢ的蛋白表達(dá)，其中，腎絡(luò)通組優(yōu)于纈沙坦組，

7、但無顯著性差異(P＞0.05)。③TGFβ1蛋白及其mRNA的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)動物在腎小管上皮細(xì)胞及腎小球內(nèi)TGFβ1蛋白及mRNA的表達(dá)均為弱陽性；其余各組表達(dá)顯著增強(qiáng)，見于腎小管上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及腎小球內(nèi)。其中，模型組較假手術(shù)組TGFβ1的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)；纈沙坦組、腎絡(luò)通組與模型組相比，TGFβ1的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性下降(P＜0.05，P＜0.01)，提示

8、腎絡(luò)通、纈沙坦均可抑制梗阻側(cè)腎組織中TGFβ1的蛋白及mRNA表達(dá)。其中，腎絡(luò)通組優(yōu)于纈沙坦組，但均無顯著性差異(P＞0.05)。④ADM蛋白的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：假手術(shù)組大鼠在腎小管上皮細(xì)胞及腎小球內(nèi)呈弱陽性表達(dá)，與假手術(shù)組比較，模型組表達(dá)顯著減弱，纈沙坦組表達(dá)較弱，腎絡(luò)通組表達(dá)明顯增強(qiáng)。其中，腎絡(luò)通組和纈沙坦組與模型組相比ADM的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01、P＜0.05)，其中腎絡(luò)通組明顯優(yōu)于纈沙坦組

9、(P＜0.01)，提示腎絡(luò)通較纈沙坦更能上調(diào)ADM蛋白的表達(dá)。⑤ADMR蛋白的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：假手術(shù)組ADMR陽性顆粒見于腎小管上皮細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性表達(dá)，與假手術(shù)組相比其余各組表達(dá)較弱，腎絡(luò)通組與模型組相比ADMR的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.05，P＜0.01)，提示腎絡(luò)通可上調(diào)梗阻側(cè)腎組織中ADMR的蛋白表達(dá)。纈沙坦組與模型組相比無顯著性差異(P＞0.05)。⑥ADMmRNA的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：

10、假手術(shù)組大鼠的ADMmRNA在腎小管上皮細(xì)胞中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，模型組顯著減弱，腎絡(luò)通及纈沙坦可使其表達(dá)增強(qiáng)。腎絡(luò)通組和纈沙坦組與模型組相比ADMmRNA的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)，其中腎絡(luò)通組明顯優(yōu)于纈沙坦組(P＜0.01)，提示腎絡(luò)通較纈沙坦更能調(diào)控梗阻側(cè)腎組織中ADM的mRNA表達(dá)。 結(jié)論：①腎絡(luò)通能減輕腎組織的病理損害，減少病變腎組織ECM成分的積聚，延緩間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。②腎絡(luò)通能抑制腎組織TG