保存液對(duì)再植脫位牙牙周膜成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、目的：脫位牙即時(shí)、有效的保存以防止牙周膜的干燥非常重要，這能直接影響再植牙的成功率。下列四種因素對(duì)牙周膜的愈合有明顯的影響強(qiáng)弱的次序?yàn)檠栏l(fā)育的階段、口外保存時(shí)間的長(zhǎng)短、立即再植、濕保存時(shí)間的長(zhǎng)短。應(yīng)盡快將其浸泡在生理性平衡介質(zhì)中，牙周膜細(xì)胞的生物學(xué)活性就可維持較長(zhǎng)時(shí)間。保存劑的篩選是牙再植研究中的一項(xiàng)重要內(nèi)容，國(guó)內(nèi)對(duì)于脫位牙保存劑選擇方面的研究非常少見(jiàn)，而對(duì)于體外測(cè)定再植牙的牙周膜細(xì)胞的活性來(lái)評(píng)價(jià)選擇脫位牙保存劑的報(bào)道更少見(jiàn)。本研究在

2、體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞的基礎(chǔ)上，用MTT(四唑鹽)比色實(shí)驗(yàn)法，比較脫位牙牙周膜細(xì)胞在六種不同的保存液(DMEM培養(yǎng)液、HBSS液、0.9％生理鹽水、唾液、牛奶、自來(lái)水)浸泡半小時(shí)、一小時(shí)、一個(gè)半小時(shí)、兩小時(shí)四個(gè)時(shí)間段后對(duì)細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。 方法： 1、人牙周膜細(xì)胞的體外培養(yǎng) 取自臨床上13～19歲因正畸需要拔除的無(wú)齲病、無(wú)齦炎的前磨牙，拔除該牙后，刮下根中1/3部位的牙周膜組織。按組織塊貼壁法，用含10％FCS

3、的DMEM培養(yǎng)液，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)匯合點(diǎn)后，用2.5g/L胰蛋白酶消化進(jìn)行傳代，取第8代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。 2、細(xì)胞增殖活性的研究 取生長(zhǎng)良好的第8代人牙周膜細(xì)胞，將細(xì)胞常規(guī)消化，調(diào)整細(xì)胞濃度以2×105/ml的濃度接種于四個(gè)96孔板內(nèi)，每孔100μl。細(xì)胞在含10％FCS的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，鏡下見(jiàn)大多數(shù)成纖維細(xì)胞貼壁后，棄去孔內(nèi)液體及不貼壁細(xì)胞，用PBS液沖洗3次后，吸干，加入不同的脫位

4、牙保存液。(1)第1塊96孔板為A組，加入不同的液體作用半小時(shí)，分7小組，每組8孔，A1組為DMEM培養(yǎng)液,A2組為HBSS液,A3組為0.9％生理鹽水,A4組為唾液,A5組為牛奶，A6組為自來(lái)水；空白對(duì)照組為A7組不含任何液體。(2)第2塊，3塊，4塊96孔板為B、C、D組分別加入以上各種液體作用1小時(shí)，1.5小時(shí)及2小時(shí)，其余處理同A組。 然后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的變化。 結(jié)果： 1.A組(0.5小時(shí))

5、，六種保存液之間的細(xì)胞增殖活性無(wú)顯著性差異(P＞0.05). 2.B組(1小時(shí))各保存液之間比較，B1組與B4、B5、B6組的細(xì)胞增殖活性比較均有顯著性差異(P＜0.05).其它組間則無(wú)。 3.C組(1.5小時(shí))組內(nèi)比較，C6組與C1、C4組的細(xì)胞增殖活性比較有顯著性差異(P＜0.05).C6組的細(xì)胞增殖活性顯著低于C1、C4組。 4.D組(2.0小時(shí))D1與D6組的細(xì)胞增殖活性比較有顯著性差異(P＜0.05)。

6、D1組的細(xì)胞增殖活性顯著高于D6組。 結(jié)論： 六組保存液在0.5小時(shí)內(nèi)對(duì)牙周膜細(xì)胞增殖活性的影響無(wú)顯著性差異。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，1.0小時(shí)后DMEM培養(yǎng)液顯示出自身的優(yōu)勢(shì)，與唾液、牛奶、自來(lái)水組細(xì)胞增殖活性比較有顯著性差異，其中自來(lái)水組牙周膜細(xì)胞增殖活性最低。1.5小時(shí)后牙周膜細(xì)胞的增殖活性均降低，但DMEM培養(yǎng)液與自來(lái)水組和唾液與自來(lái)水組的細(xì)胞增殖活性比較有顯著性差異，自來(lái)水組牙周膜細(xì)胞增殖活性明顯低于其它兩組。2小時(shí)后