狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的：通過(guò)體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，觀察狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)其生物學(xué)性狀的影響。
　　方法：人皮膚成纖維細(xì)胞通過(guò)體外培養(yǎng)，培養(yǎng)液中加入不同濃度的膠原蛋白肽，分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和空白對(duì)照組，使用酶標(biāo)法檢測(cè)狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的影響、使用Annexin V/PI雙染法檢測(cè)狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)成纖維細(xì)胞凋亡的影響；使用Elisa試劑盒檢測(cè)狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)成纖維細(xì)胞分泌TGF-β1、SOD等指標(biāo)的表達(dá)變化；使用Western

2、 blot法檢測(cè)I型膠原蛋白的表達(dá)；使用劃痕實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)膠原蛋白肽對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞遷移率的影響。
　　結(jié)果：1.細(xì)胞增殖：不同濃度的膠原蛋白肽處理人皮膚成纖維細(xì)胞48h后，通過(guò)CCK-8試劑盒檢測(cè)膠原蛋白肽對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果顯示經(jīng)膠原蛋白肽刺激后，成纖維細(xì)胞增殖速度呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)，隨著膠原蛋白肽濃度的增高，細(xì)胞的增殖速度也加快，與空白對(duì)照組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。在膠原蛋白肽濃度為25mg/ml的條件

3、下，成纖維細(xì)胞增殖速度最快。2.細(xì)胞凋亡：25mg/ml膠原蛋白肽處理24h后，我們通過(guò)Annexin-v-FITC/PI試劑盒檢測(cè)了膠原蛋白肽對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞凋亡的影響。經(jīng)膠原蛋白肽處理后，相比空白對(duì)照組，成纖維細(xì)胞的凋亡比率顯著下降（P＜0.05）膠原蛋白肽可有效促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞凋亡，并可顯著提高成纖維細(xì)胞分泌TGF-β1、SOD等活性因子的含量(t=4.07，F(xiàn)=774.23、2100.63，P＜0.05)。

4、與空白對(duì)照組相比，膠原蛋白肽組細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)（P＜0.05）3.Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)不同濃度膠原蛋白肽刺激后，結(jié)果顯示TGF-β1和SOD表達(dá)均升高，并呈劑量依賴性，25mg/ml及50mg/ml的濃度較空白對(duì)照組差異均具有極其顯著性差異（P＜0.01），其中，以50mg/ml作用最為顯著。4.劃痕實(shí)驗(yàn)：結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)膠原蛋白肽作用后的細(xì)胞遷移率顯著提高（P＜0.01)。5.Western blot實(shí)驗(yàn)：結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)膠原蛋白肽作用