小分子Syk抑制化合物對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維滑膜細(xì)胞增殖和分泌IL-6,MMP-3的影響.pdf

1、研究背景：
　　近年來(lái),有研究表明脾酪氨酸激酶(Syk)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用,抑制Syk的激活,可以阻斷RA發(fā)病過(guò)程中的炎癥連鎖反應(yīng),為RA的治療提供新的途徑,于是,Syk成為了人們研究RA藥物治療的新靶點(diǎn)。華東理工大學(xué)藥學(xué)院發(fā)現(xiàn)了一種小分子化合物HL131012對(duì)Syk活性具有較強(qiáng)的抑制作用,進(jìn)一步采用傳統(tǒng)藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾,進(jìn)行一系列結(jié)構(gòu)優(yōu)化,合成了一些相關(guān)衍生物,通過(guò)激酶抑制活性測(cè)試,初步篩選出5種抑制作用較

2、好的小分子化合物,為進(jìn)一步研究它們?cè)诩?xì)胞水平對(duì)Syk的抑制作用,并篩選出抑制Syk生物學(xué)活性較好的小分子化合物,與我們合作,進(jìn)行本課題的研究。
　　目的：
　　觀察小分子Syk抑制化合物對(duì)RA成纖維滑膜細(xì)胞增殖及釋放炎性因子IL-6, MMP-3的影響,通過(guò)與陽(yáng)性藥物 R406進(jìn)行對(duì)比,篩選出生物學(xué)活性較好的小分子Syk抑制化合物,下一步深入研究其對(duì)RA的作用效果,為今后開發(fā)治療RA的藥物提供參考價(jià)值。
　　方法：

3、r>　　MTT比色法測(cè)定小分子Syk抑制化合物和陽(yáng)性藥物在24h、48h、72h對(duì)RA FLS增殖的半數(shù)抑制濃度(IC50),比較分析對(duì)RA FLS增殖抑制效果較好的小分子化合物;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)檢測(cè)小分子Syk抑制化合物和陽(yáng)性藥物對(duì)RA FLS分泌IL-6、MMP-3的影響,比較分析抑制RA FLS分泌IL-6,MMP-3效果較好的小分子化合物。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處

4、理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±S)表示;多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析及SNK-q檢驗(yàn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)P=0.01,P<0.01表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至第三代時(shí),普通光鏡觀察成纖維滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)均一,胞體呈長(zhǎng)梭形,伸出突起;FCM檢測(cè)細(xì)胞CD90陽(yáng)性,CD68陰性,符合成纖維滑膜細(xì)胞的典型形態(tài)學(xué)特征。
　　2. MTT結(jié)果顯示對(duì)RA FLS作用24小時(shí)后,HL131078的IC50(μm

5、ol/L)為(16.30±1.739),與陽(yáng)性藥物IC50(μmol/L)(28.02±1.611)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);對(duì)RA FLS作用48小時(shí)后,HL131012、HL131074、HL131078、HL131087的IC50(μmol/L)值分別為18.44±0.788,21.08±2.033,11.17±0.858,22.17±1.783,與陽(yáng)性藥物 IC50(μmol/L)(26.71±1.859)比較,差

6、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);對(duì)RA FLS作用72小時(shí)后,HL131012、HL131074、HL131078的IC50(μmol/L)值分別為3.58±0.484,9.74±1.677,5.44±0.785,與陽(yáng)性藥物IC50(μmol/L)(13.56±1.471)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。綜合以上數(shù)據(jù)得出,在對(duì)RA FLS分別作用24h、48h、72h時(shí),小分子化合物 HL131078和陽(yáng)性藥物對(duì)其增殖的IC50

7、相比較,差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3. ELISA結(jié)果顯示高濃度各小分子化合物組的IL-6/MMP-3含量分別與低濃度各小分子化合物組的IL-6/MMP-3含量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高濃度時(shí), HL131012,HL131078組的IL-6(pg.ml-1)和MMP-3(ng.ml-1)含量分別為(13.68±0.91,0.268±0.02),(17.69±0.42,0.313±0.014),與陽(yáng)

8、性藥物組 IL-6和 MMP-3的含量(19.93±0.97,0.329±0.011)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　小分子Syk抑制化合物HL131078能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維滑膜細(xì)胞增殖。小分子化合物HL131012,HL131078能夠顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維滑膜細(xì)胞分泌IL-6和MMP-3。小分子化合物HL131078具有較好的抗RA的生物學(xué)活性,可以作