地塞米松對脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y-,1-受體表達(dá)水平及TNF-α分泌影響的初步研究.pdf

1、疼痛對人類的健康危害甚大。脊髓背角對傷害性信息的傳遞和調(diào)制發(fā)揮重要作用。星形膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布,參與結(jié)構(gòu)和功能維持、免疫反應(yīng)以及神經(jīng)疾病的發(fā)病等病理生理過程。研究表明,星形膠質(zhì)細(xì)胞與疼痛有關(guān),脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的激活是疼痛發(fā)生和持續(xù)的關(guān)鍵因素,同時與中樞痛覺過敏的產(chǎn)生與維持密切相關(guān)。以往研究已發(fā)現(xiàn),疼痛的發(fā)生和維持與嘌呤類P2受體有關(guān),嘌呤類P2Y受體參與傷害性信息傳遞。本實驗室曾俊偉等已經(jīng)證實,脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)P2Y1

2、受體,P2Y1受體激活能引起炎性致痛因子TNF-α的分泌增加。
　　 地塞米松作為臨床常用的糖皮質(zhì)激素,目前研究多集中于它抑制炎性因子分泌而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用,但機(jī)制尚不十分清楚。地塞米松能否通過介導(dǎo)P2Y1受體抑制脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α的分泌?需要進(jìn)一步研究。本實驗通過純化培養(yǎng)大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察不同濃度地塞米松對其P2Y1受體表達(dá)的影響,及地塞米松對ADPβs激活后的背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體表達(dá)的影響,并通過

3、其對TNF-α分泌的改變推測可能的機(jī)制。
　　 方法:培養(yǎng)并純化大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞,免疫組織化學(xué)觀察背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體表達(dá)水平的變化;ELISA技術(shù)檢測背角星形膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α的分泌。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分:
　　 1.大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)與純化,免疫組織化學(xué)鑒定細(xì)胞類型。結(jié)果表明,脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞純度在98％以上。
　　 2.地塞米松呈劑量依賴性抑制脊髓背

4、角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體的表達(dá);糖皮質(zhì)激素受體阻斷劑(RU486)特異性阻斷糖皮質(zhì)激素受體后,可拮抗地塞米松對背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體表達(dá)的抑制作用。
　　 3.地塞米松呈劑量依賴性抑制脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α的分泌。RU486特異性阻斷糖皮質(zhì)激素受體后,可拮抗地塞米松對脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α分泌的抑制作用。
　　 第二部分:
　　 1.ADPβs激活脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞,呈劑量依賴性上調(diào)P2

5、Y1受體的表達(dá),在終濃度為100μmol/L,時P2Y1受體表達(dá)最多,并促進(jìn)背角星形膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α分泌;P2Y1受體阻斷劑(MRS2179)特異性阻斷P2Y1受體后,可拮抗ADPβs對P2Y1受體表達(dá)及TNF-α分泌的促進(jìn)作用。
　　 2.ADPβs激活脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞,不同濃度地塞米松可呈劑量依賴性的拮抗ADPβs對背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體表達(dá)及TNF-α分泌的促進(jìn)作用。
　　 結(jié)論:
　　 1.地

6、塞米松對脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體表達(dá)及TNF-α的分泌均有抑制作用。
　　 2.ADPβs激活背角星形膠質(zhì)細(xì)胞可以使P2Y1受體表達(dá)上調(diào)。
　　 3.地塞米松可抑制激活的脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞P2Y1受體的表達(dá)及TNF-α的分泌。
　　 綜上所述,地塞米松可能通過抑制P2Y1受體表達(dá)和TNF-α的分泌起到提高痛閾的作用;亦可能通過介導(dǎo)P2Y1受體抑制炎性因子TNF-α的分泌,說明地塞米松在疼痛狀態(tài)下起到了鎮(zhèn)