P2Y6受體參與LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞MIP-2表達(dá)和分泌.pdf

1、目的：探討脂多糖（LPS）刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞表面膜受體P2Y6對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-2（MIP-2）的表達(dá)及分泌的影響以及可能的作用機(jī)制，揭示小膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元相互作用的橋梁，為以后神經(jīng)變性疾病的治療開辟新的切入點(diǎn)打下基礎(chǔ)。 方法：采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)LPS刺激小膠質(zhì)細(xì)胞BV-2后MIP-2的表達(dá)及釋放，采用Western blot檢測(cè)LPS刺激BV-2細(xì)胞P2Y6受體的表

2、達(dá)。分別觀察P2Y6受體激動(dòng)劑UDP、特異性抑制劑MRS2578和三磷酸腺苷二磷酸酶apyrase對(duì)BV-2細(xì)胞MIP-2表達(dá)及釋放的影響。檢測(cè)UDP作用于BV-2細(xì)胞后細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2）、P38激酶、c-Jun氨基末端激酶（JNK）的表達(dá)，以及分別加入三者的抑制劑U0126、SB203580和SP600125后對(duì)MIP-2表達(dá)及釋放的影響。采用TUNEL方法檢測(cè)BV-2和N-2a細(xì)胞共培養(yǎng)體系中神經(jīng)元凋亡的改變。

3、 結(jié)果：①LPS刺激小膠質(zhì)細(xì)胞后P2Y6受體表達(dá)增加，同時(shí)MIP-2 mRNA 表達(dá)和MIP-2分泌也增加。②MRS2578和apyrase能夠部分抑制LPS刺激小膠質(zhì)細(xì)胞引起的MIP-2的表達(dá)及釋放，而MRS2578能夠顯著抑制UDP誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的MIP-2。③P2Y6受體激動(dòng)劑UDP誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞ERK1/2磷酸化，p-ERK1/2的抑制劑U0126能夠顯著抑制LPS刺激MIP-2的表達(dá)及分泌，而SB203580和SP6