SHP-2與PI-3K-Akt傳導(dǎo)通路在急性白血病細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、在信號(hào)傳導(dǎo)過程中,蛋白質(zhì)中酪氨酸的磷酸化以及去磷酸化是非常重要的環(huán)節(jié).蛋白酪氨酸磷酸酶PTPs,是將磷酸化的信號(hào)分子的酪氨酸去磷酸化的激酶,同蛋白酪氨酸激酶PTKs一樣在信號(hào)傳導(dǎo)及控制細(xì)胞活性中發(fā)揮著重要的作用. SHP-2屬于蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatase,PTPase)家族中的一員,是一種含有SH2結(jié)構(gòu)域的酪氨酸蛋白磷酸酶,上個(gè)世紀(jì)九十年代由幾個(gè)實(shí)驗(yàn)小組各自通過克隆的方法發(fā)現(xiàn),分別命名為S

2、HP-2、PTP1D、SH-PTP3、SH-PTP2以及Syp.SHP-2通過SH2功能域結(jié)合到酪氨酸磷酸蛋白質(zhì),使其自身結(jié)構(gòu)中的PTP酶激活,從而作為下游信號(hào)分子參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移、死亡,是細(xì)胞因子、抗原、細(xì)胞外基質(zhì)等的下游信號(hào)分子.近年來的一些實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),SHP-2在正常造血細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育的有關(guān)信號(hào)通路中起十分重要的作用,同時(shí)在腫瘤細(xì)胞的粘附、胚胎細(xì)胞的發(fā)育中起著十分重要的作用. 眾多研究表明,SHP-

3、2在兩個(gè)重要的信號(hào)途徑PI-3K/Akt和Ras/Erk的上游將生長(zhǎng)增殖信號(hào)傳遞給下游效應(yīng)分子,正調(diào)控造血細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育.PI-3K/Akt信號(hào)途徑由于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、生存和抗凋亡,已被證實(shí)在許多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用. 脂酰激醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI-3K)PI-3K是一種由110kDa催化亞單位和85kDa調(diào)節(jié)亞單位組成的異二聚體,包括2個(gè)SH2和1個(gè)SH3結(jié)構(gòu)

4、域,PI-3K激活與細(xì)胞骨架組裝、細(xì)胞分化、抗凋亡及葡萄糖吸收有關(guān),其下游為Akt.pAkt是Akt的磷酸化形式.PI-3K/Akt途徑作為細(xì)胞內(nèi)重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,通過影響下游凋亡相關(guān)蛋白、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白等效應(yīng)分子的活化過程,在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著抑制凋亡、促進(jìn)增殖的關(guān)鍵作用.PI-3K/Akt通路分子的基因突變,或上游調(diào)控信號(hào)的異常放大,均可導(dǎo)致該通路過度激活,細(xì)胞生存與凋亡失衡,正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化.近年來的研究發(fā)現(xiàn),PI-3K/Ak

5、t通路的持續(xù)性活化在白血病發(fā)病中扮演著十分重要的作用.但目前國(guó)內(nèi)關(guān)于SHP-2和PI-3K/Akt途徑在急性白血病發(fā)病方面的文獻(xiàn)還鮮見報(bào)道. 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用S-P免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)急性白血病患者單個(gè)核細(xì)胞中的SHP-2、PI-3K、pAkt的表達(dá)及相關(guān)性進(jìn)行了研究,探討他們?cè)诩毙园籽“l(fā)病中的作用及與臨床特征之間的關(guān)系. [材料與方法]采集58例初治急性白血病患者骨髓標(biāo)本后,使用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞置備細(xì)胞

6、涂片,采用S-P免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞中SHP-2、PI-3K、pAkt抗原的表達(dá)水平,15名健康人為正常對(duì)照. 1.研究對(duì)象:(1)初治白血病組(AL):共收集標(biāo)本58例,其中男35例,女23例,年齡14-75歲,中位年齡35歲.將全部急性白血病患者分為兩組:①急性髓細(xì)胞白血病組(AMI.)41例,其中其中M<,0> 2例,M<,2> 23例,M<,3> 7例,M<,4> 3例,M<,5> 3例,M<,6> 2例,M

7、<,7> 1例;②急性淋巴細(xì)胞白血病組(ALL)17例;所有急性白血病患者均依據(jù)FAB分型診斷標(biāo)準(zhǔn)劃分.(2)完全緩解組(AL-CR):共35例,為初治組治療后部分完全緩解的患者骨髓標(biāo)本.(3)對(duì)照組(Control):15例,為非惡性血液病骨髓正常者.所有觀察對(duì)象均取自于2006年4月至12月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科門診及住院就診患者. 2.標(biāo)本處理:化療前采集患者骨髓和對(duì)照者骨髓1ml,分離單個(gè)核細(xì)胞,制備細(xì)胞滴片,采用免

8、疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)SHP-2、pI-3K、pAkt的抗原表達(dá)在AL(Acuteleukemia)、AL-CR及正常對(duì)照者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá). 3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,SHP-2、PI-3K、pAkt的抗原表達(dá)陽(yáng)性率比較采用X<'2>檢驗(yàn),變量間的相關(guān)分析應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn). [結(jié)果]1 SHP-2在正常人骨髓標(biāo)本中不表達(dá)或呈微弱表達(dá).在AL組患者骨髓單

9、個(gè)核細(xì)胞中84.5﹪呈現(xiàn)細(xì)胞胞漿中的陽(yáng)性和(或)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),其中AML組陽(yáng)性率為82.9﹪,ALL組陽(yáng)性率為88.2﹪,兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).在AL-CR組中陽(yáng)性率為31.4﹪,其中AML-CR組陽(yáng)性率為29.2﹪,ALL-CR陽(yáng)性率為36.4﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).AL組與正常對(duì)照組,AL,組與AL-CR組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且初治AML組與AML-CR組間及ALL與ALL

10、-CR組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),AL-CR組與對(duì)照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).@2 2.PI-3K在正常人骨髓標(biāo)本中不表達(dá)或微弱表達(dá).在初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中81.0﹪呈現(xiàn)細(xì)胞漿的陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),其中.AML組的陽(yáng)性率為80.5﹪,ALL組的陽(yáng)性率為82.3﹪,兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).在AL-CR中陽(yáng)性率為48.6﹪,其中AMI,CR組陽(yáng)性率為45.8﹪,ALL-CR組陽(yáng)性率為54.5﹪,兩

11、者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).AL組與正常對(duì)照組,AL組與AL-CR組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),AL-CR組與對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且AML與AML-CR組間及ALL與ALL-CR組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05). 3.pAkt在正常人骨髓標(biāo)本中不表達(dá)或微弱表達(dá).在初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中60.3﹪呈現(xiàn)胞核或胞漿的陽(yáng)性和(或)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),以胞漿表達(dá)為主.其中AML組的表達(dá)陽(yáng)性率為

12、58.5﹪,ALL組陽(yáng)性率為64.7﹪,兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).在AL-CR組中陽(yáng)性率為42.9﹪,其中AMbCR組陽(yáng)性率為41.7﹪,ALL-CR組陽(yáng)性率為45.5﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).AL組與正常對(duì)照組,AL組與AL-CR組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);AL-CR組與對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且AML與AML-CR組間及ALL與ALL-CR組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

13、.05). 4.相關(guān)性分析顯示PI-3K和‘pAkt呈正相關(guān)(r=0.477,P<0.05). 5.相關(guān)性分析顯示SHP-2和PI-3K呈正相關(guān)(r=0.338,P<0.05). 6.SHP-2蛋白表達(dá)水平與患者的年齡、性別、FAB分型無明顯相關(guān)性(P>0.05),但與白細(xì)胞高低及髓外浸潤(rùn)特征呈正相關(guān).1、SHP-2和PI-3K、pAkt在急性白血病細(xì)胞中呈過度高表達(dá); 2、SHP-2與白血病細(xì)胞惡性增殖