集落刺激因子受體及耐藥蛋白在急性白血病細胞中的表達及意義.pdf

1、研究的背景和目的： 1、背景： 細胞因子對造血的調(diào)控一直是國內(nèi)外研究的熱點。粒細胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)、粒-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)均有調(diào)節(jié)造血干/祖細胞增殖、分化、成熟的功能，在造血調(diào)控中起重要的作用。同時在多種惡性血液病，如急性

2、白血病(AL)的發(fā)生和發(fā)展中也起重要的作用，但其作用機制目前尚未明了。而G-CSF與GM-CSF的生物學功能的發(fā)揮是通過與效應細胞膜上具有高度特異性的受體(G-CSF receptor、GM-CSF receptor,G-CSFR、GM-CSFR)結(jié)合而完成的。因此，研究G-CSFR、GM-CSFR在急性髓細胞白血病(AML)和急性淋巴細胞白血病(ALL)中的表達規(guī)律，并分析兩種受體表達的相關(guān)性，為臨床合理的應用集落刺激因子提供重要的理

3、論依據(jù)，也為AL的治療提供新的治療途徑。 目前，重組人G-CSF、GM-CSF(rhG-CSF、rhGM-CSF)已被廣泛應用于臨床多種惡性血液病、腫瘤誘導化療及骨髓移植中，可以減少粒細胞恢復和發(fā)熱時間，并取得了顯著的療效。它們還可以誘導靜止期白血病細胞進入有絲分裂期，從而增加對化療藥物的敏感性。然而，體外研究發(fā)現(xiàn)：G-CSF和GM-CSF還可以促進表達相應受體的白血病細胞的增殖，提示G-CSF和GM-CSF不但可以促進正常骨

4、髓細胞的增殖，而且也可以促進白血病細胞的增殖。因此，除了升高外周血白細胞數(shù)目外，它們是否有促進白血病細胞增殖的可能，以及對緩解率、長期生存率的影響仍是臨床醫(yī)師關(guān)注的焦點。因此，觀察重組人G-CSF、GM-CSF在AL中的應用對其預后的影響具有重要的臨床意義。 近年來盡管出現(xiàn)了許多新的化療藥物和化療方案，但是仍有部分AL患者因化療失敗而死亡，多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)現(xiàn)象仍然是常規(guī)化療難以使白血病

5、獲得長期緩解和早期復發(fā)的主要障礙，因此對MDR的研究尤為重要。MDR種類很多、作用機制非常復雜。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)和肺耐藥蛋白(1ung resistance protein，LRP)是通過兩種不同的作用機制對腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥的?；熐皺z測AL患者P-gp和LRP的表達率為選擇合適的化療藥物和加用耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供了重要的理論依據(jù)。這兩種蛋白在AL患者的表達對化療的敏感性以及緩解率、生存率的影響仍存在爭議，

6、兩種蛋白在AL的表達是否存在相關(guān)性及同時檢測這兩種蛋白是否較單獨檢測一種蛋白對AL緩解率有更好的評價，國內(nèi)很少報道。 有研究發(fā)現(xiàn)：惡性造血細胞自身可以合成并分泌集落刺激因子，并促進其相應的受體的表達，與其受體結(jié)合后刺激自身增殖，從而使腫瘤細胞更容易產(chǎn)生耐藥。因此，分析集落刺激因子受體與耐藥蛋白表達的相關(guān)性，對于探討耐藥的機制具有重要意義。 2、目的： ①檢測AL患者骨髓單個核細胞G-CSFR、GM-CSFR和P

7、-gP、LRP的表達率。 ②分析G-CSFR、GM-CSFR和P-gp、LRP在AML、ALL患者的表達規(guī)律。 ③分析G-CSFR、GM-CSFR和P-gp、LRP的表達率與AL患者的年齡、性別、FAB亞型的關(guān)系。 ④研究G-CSFR、GM-CSFR和P-gP、LRP在AL患者中表達的相關(guān)性。 ⑤觀察rhG-CSF在AL患者中應用的臨床療效。 ⑥分析P-g15、LRP的表達率與AL患者臨床癥

8、狀和臨床緩解率的關(guān)系以及P-gp和LRP共同表達的臨床意義。 研究的對象和方法： 1、對象：選擇2005年3月～2005年12月在山東省立醫(yī)院門診、住院治療的急性白血病患者79例(初治60例、復發(fā)/難治19例)和單純?nèi)辫F性貧血患者 (作為對照組)15例為研究對象。 2、方法： ①采用流式細胞技術(shù)檢測G-CSFR、GM-CSFR、P-gp和LRP的表達率。 ②用Wilcoxon檢驗法分析G-CSF

9、R、GM-CSFR和P-gP、LRP在AML、ALL患者的表達規(guī)律。 ③用Spearman等級相關(guān)分析G-CSFR、GM-CSFR、P-gp和LRP的表達率與年齡、性別、FAB亞型的關(guān)系以及其相關(guān)性。 ④用X<'2>檢驗分析rhG-CSF的應用對AL患者治療的影響及P-gp、LRP的表達與臨床緩解率的關(guān)系。 研究結(jié)果： 1．60例初治AL患者G-CSFR的表達率低于對照者(P<0.05)，AML組G-CS

10、FR的表達率明顯高于ALL組(PO.05)，ALL組明顯低于對照組(p

11、組相比無顯著性差異(P>O.05)。復發(fā)/難治組P-gp的表達率顯著高于相應的初治組(p=O.0038，P(0.05)，與G-CSFR、P

12、-gp的表達率無明顯相關(guān)性(P均大于0.05)；初治AL患者G-CSFR的表達率與P-gp、LRP的表達率均無相關(guān)性(P均大于0.05)。初治、復發(fā)/難治AL患者P-gP、LRP的表達率無相關(guān)性(r<,s>=0.0746，P>0.05)。 6．G-CSFR、GM-CSFR、P-gP和LRP的表達率與年齡、性別、FAB亞型均無明顯相關(guān)性(p>0.05)，但LRP在M<,5>中的表達率較高，在M<,3>中表達低，兩者有顯著性差異(

13、P=0.0063，P<0.05)。 7．應用rhG-CSF能減少AL患者中性粒細胞缺乏及發(fā)熱的天數(shù)(P<0.05)，但對緩解率無顯著影響(P>0.05)。 8．P-gp、LRP表達陽性的患者出現(xiàn)粒細胞缺乏、感染，發(fā)生DIC腦出血，淋巴結(jié)、脾臟腫大及皮膚浸潤等髓外浸潤的機率稍高于P-gp、LRP表達陰性的患者，但無顯著統(tǒng)計學意義(P均大于0.05)。 9．AL患者P-gp<'+>/LRP<'+>組緩解率低于P-gp

14、<'+>/LRP<'->組、P-gp<'->/LRP<'+>組(P<0.05)，并明顯低于P-gp<'->/LRP<'->組(P<0.05)。 結(jié)論 ①初治AL患者G-CSFR和GM-CSFR表達率均低于對照組，表明G-CSFR和GM-CSFR表達率隨著細胞的成熟而增加，且它們在AML組的表達率高于ALL組，為臨床用藥提供了理論依據(jù)。 ②復發(fā)/難治組P-gp、LRP的表達率均高于初治組，因此，復發(fā)/難治患

15、者更易產(chǎn)生耐藥，對化療反應差。ALL組P-gp、LRP的表達率高于AML組，解釋了ALL患者緩解率低、復發(fā)率高的原因；還可以根據(jù)表達率的情況選擇合適的化療藥物。 ③G-CSFR、GM-CSFR和P-gp、LRP的表達率與年齡、性別、FAB亞型 無顯著相關(guān)性。但LRP在M<,5>中的表達率高，在M<,3>中表達率低，兩者有顯著 性差異。這與臨床上M<,5>的緩解率低、而M<,3>的緩解率高相一致。 ④初治A

16、L患者GM．CSFR的表達率與L,RP的表達率呈正相關(guān)，可能與內(nèi) 在的作用機制有關(guān)，GM．CSFR的表達率與G—CSFR、P-gp的表達率無明顯相 關(guān)性；G-CSFR的表達率與P-gp、LRP的表達率無相關(guān)性；P-gp和LRP兩者 的表達率無相關(guān)性。 ⑤對于初治AL患者，應用rhG-CSF能減少急性白血病患者化療期間及化 療后中性粒細胞缺乏及發(fā)熱的天數(shù)，降低抗生素的用量和感染相關(guān)死亡率，但 對緩解率無影響。