應(yīng)用梔子苷灌胃建立小鼠肝損傷模型的初步研究.pdf

1、　　【目的】統(tǒng)計研究中藥肝毒性與藥性理論(四氣、五味、歸經(jīng)等)的相關(guān)性。并在此基礎(chǔ)上,初步探索應(yīng)用肝毒性中藥梔子的主要成分梔子苷灌胃建立小鼠肝損傷模型,從過氧化損傷和超微結(jié)構(gòu)上分析其機制。
　　【方法】
　　1.中藥肝毒性與藥性理論的相關(guān)性研究：
　　應(yīng)用文獻(xiàn)研究方法,以文獻(xiàn)和專著中報道的具有明顯肝毒性的中藥為研究對象；藥性理論內(nèi)容以國家中醫(yī)藥管理局編寫的《中華本草》記載為準(zhǔn),適當(dāng)參考其他典籍。進(jìn)行資料整理,統(tǒng)計

2、分析肝毒性中藥四氣、五味、歸經(jīng)的分布規(guī)律,并探索中藥肝毒性與藥性理論的相關(guān)性。
　　2.應(yīng)用梔子苷灌胃建立小鼠肝損傷模型的研究：
　　(1)昆明種清潔級小鼠50只,體重18-22g,隨機分為5組,分別為空白組,梔子苷正常劑量組、15倍劑量組、30倍劑量組、45倍劑量組,每組10只,雌雄各半。梔子苷各組分別以28mg·kg?1、420mg·kg?1、840mg·kg?1、1260mg·kg?1,按0.2mL·10g?1體重

3、梔子苷水溶液灌胃?？瞻捉M給予等體積蒸餾水灌胃。每日1次,連續(xù)7d ,末次給藥后禁食18h處死。分別檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶( alanine aminotransferase,ALT),天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspertate aminotransferase,AST),計算肝指數(shù),觀察肝組織普通病理形態(tài)學(xué)變化,以探索梔子苷致明顯肝損傷的相對合適劑量。
　　(2)昆明種清潔級小鼠50只,體重18-22g,隨機分為梔子苷給藥組40

4、只、空白組10只,雌雄各半。以探索出的相對合適劑量的梔子苷水溶液灌胃,每日1次,連續(xù)給藥。給藥組于灌胃4d、7d、10d、14d各處死10只,處死前禁食18h?？瞻捉M給予等體積蒸餾水灌胃。分別檢測血清ALT、AST、總膽紅素(total bilirubin,TBil),計算肝指數(shù),觀察肝組織普通病理形態(tài)學(xué)變化,以確定致明顯肝損傷的相對合適時間。探索合適劑量梔子苷灌胃合適時間,小鼠肝組織丙二醛(malondialdehyde, MDA)、

5、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及電鏡下超微結(jié)構(gòu)的改變,空白組做相應(yīng)處理。
　　【結(jié)果】
　　1.中藥肝毒性與藥性理論的相關(guān)性研究：(1)搜集肝毒性中藥 245 味,四氣歸屬之間有顯著差異(P<0.05),由高到低排序為：寒性、溫性、平性、涼性、熱性,其中歸屬于寒性的藥物明顯偏高。搜集一般中藥474味,四氣歸屬之間有顯著差異(P<0.05),排序與245味肝毒性中藥一致,其

6、中歸屬于寒性、溫性的藥物 明顯偏高(P<0.005)。245 味肝毒性中藥與 474 味一般中藥在四氣歸屬上有相似的分布規(guī)律,統(tǒng)計分析搜集到的藥物,中藥的肝毒性與四氣歸屬無相關(guān)性(P>0.05)。(2)245 味肝毒性中藥,五味歸屬之間有顯著差異(P<0.05),由高到低排序為：苦味、辛味、甘味、酸味、澀味、咸味、淡味,其中五味歸屬于苦味、辛味的藥物明顯偏高(P<0.002)。474 味一般中藥,五味歸屬之間有顯著差異(P<0.05),

7、由高到低排序為苦味、甘味、辛味、咸味、澀味、酸味、淡味,其中五味歸屬于苦味、甘味、辛味者明顯偏多(P<0.002)。統(tǒng)計分析搜集到的 245味肝毒性中藥與474味一般中藥,中藥肝毒性與五味歸屬有相關(guān)性,但關(guān)聯(lián)度不高(P<0.05,rp=0.137)。(3)搜集有歸經(jīng)記載的肝毒性中藥178味,歸經(jīng)之間有顯著差異(P<0.05),由高到低排序為：肝經(jīng)、肺經(jīng)、胃經(jīng)、脾經(jīng)、腎經(jīng)、心經(jīng)、大腸經(jīng)、膀胱經(jīng)、膽經(jīng)、小腸經(jīng)、心包經(jīng)、三焦經(jīng),其中歸經(jīng)于肝經(jīng)

8、的明顯偏多(P<0.0008)。474 味一般中藥,歸經(jīng)之間有顯著差異(P<0.05),排序與 178 味肝毒性中藥一致,歸經(jīng)于肝經(jīng)的明顯偏多( P<0.0008)。178味肝毒性中藥與 474味一般中藥在歸經(jīng)上有相似的分布規(guī)律,統(tǒng)計分析搜集到的藥物,中藥肝毒性與歸經(jīng)無相關(guān)性(P>0.05)。
　　2.應(yīng)用梔子苷灌胃建立小鼠肝損傷模型的研究：(1)不同劑量梔子苷灌胃對小鼠血清ALT、AST,肝指數(shù)的影響：與空白組比較,正常劑量的

9、梔子苷對小鼠血清ALT、AST及肝指數(shù)無明顯影響(P>0.05)。15、30、45倍劑量時,ALT、AST及肝指數(shù)顯著升高,與空白組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),以30和45倍劑量組損傷明顯。(2)不同劑量梔子苷灌胃對小鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響：與空白組比較,正常劑量的梔子苷對小鼠肝組織形態(tài)無明顯影響(P>0.005)。梔子苷15、30、45倍劑量組與空白組比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.005),其中以30、45倍劑量組肝損傷明顯。(

10、3)30倍劑量梔子苷灌胃不同時間對小鼠血清ALT、AST、TBil,肝指數(shù)的影響：與空白組比較,應(yīng)用30倍劑量梔子苷灌胃4d、7d、10d、14d組小鼠血清ALT、AST、TBil活性,肝指數(shù)顯著升高(P<0.05),但四組之間比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(4)30倍劑量梔子苷灌胃不同時間對肝組織形態(tài)學(xué)的影響：與空白組比較,應(yīng)用30倍劑量梔子苷灌胃4d、7d、10d、14d后,肝組織形態(tài)變化有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.005),其中

11、灌胃7d、10d、14d肝損傷明顯。(5)30倍劑量梔子苷灌胃7d對小鼠肝組織MDA、GSH-Px的影響：與空白組比較,應(yīng)用30倍劑量梔子苷灌胃7d小鼠肝組織MDA、GSH-Px無明顯改變(P>0.05)。(6)30倍劑量梔子苷灌胃7d對小鼠超微結(jié)構(gòu)的影響：與空白組比較,應(yīng)用30倍劑量梔子苷灌胃7d,小鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)改變明顯( P<0.05)。
　　【結(jié)論】(1)肝毒性中藥在四氣歸屬和歸經(jīng)方面有明顯差別,但與一般中藥比較,中藥