小鼠急性肝損傷模型的建立及GSTA1分析.pdf

1、近年來肝臟疾病對人類的健康和社會的發(fā)展造成嚴重威脅，養(yǎng)殖業(yè)中肝病的發(fā)病率明顯增高，不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失，而且通過食物鏈直接或間接對人類健康造成危害，引發(fā)諸多食品安全問題。急性肝損傷是多種肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展及最終走向肝功能衰竭的始動環(huán)節(jié)和共同途徑，建立與人類急性肝損傷發(fā)展病變過程相似的動物模型極為重要。深入研究和探討急性肝損傷的發(fā)病機制以及治療措施，對慢性肝臟疾病的防治具有重要意義。GSTA1是Ⅱ相結(jié)合反應(yīng)同功酶GST的一個亞

2、型，在抗氧化損傷、抗腫瘤方面具有重要作用，并有可能成為藥物研發(fā)重要的新方向。目前關(guān)于GSTA1在急性肝損傷中的變化研究較少，尚未見GSTA1在急性肝損傷中的作用研究。明確GSTA1在急性肝損傷中的變化將為GSTA1保護作用及其機制的研究提供理論基礎(chǔ)和試驗依據(jù)。
　　 選用雄性昆明小鼠為實驗動物，研究并明確四氯化碳(CCl4)致小鼠急性化學(xué)性肝損傷、醋氨酚(APAP)致小鼠急性藥物性肝損傷、乙醇致小鼠急性酒精性肝損傷的建立方法和評

3、價方法。通過篩選獲得最佳的染毒途徑、劑量和時間，以此為基礎(chǔ)復(fù)制三種小鼠急性肝損傷模型。CCl4模型以血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)、肝組織指標(SOD、MDA、GSH、GSH-Px)和肝臟病理組織學(xué)分析進行評價；APAP模型以血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)、肝組織指標(SOD、MDA、GSH、GSH-Px、NO)和肝臟病理組織學(xué)分析進行評價；乙醇模型以血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)、肝組織指標(SOD、MDA、GSH、GSH-Px、TG)和肝

4、臟病理組織學(xué)分析進行評價。并在成功復(fù)制的各模型中，檢測血清和肝臟中GSTA1含量和活性變化情況。GSTA1含量檢測為ELISA原理，采用小鼠GSTA1試劑盒進行。GSTA1活性檢測采用比色法，以NBD-Cl為底物，通過GSTA1所催化的酶促反應(yīng)生成物NBD-SG的吸光度來計算。血清中酶活性表達為每分鐘每毫升血清中GSH反應(yīng)生成物的量，肝組織中酶活性表達為每分鐘每毫克胞漿蛋白中GSH反應(yīng)生成物的量。
　　 研究結(jié)果表明：
　

5、　 1.以0.35％ CCl4油溶液，按10 mL·kg-1劑量灌胃，染毒24 h可成功復(fù)制CCl4致小鼠急性肝損傷模型。模型組血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高，與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，肝組織中各指標變化與對照組相比均差異極顯著(P<0.01)，病理切片觀察到模型組小鼠肝細胞顆粒變性，胞漿崩解，細胞核濃縮，炎性細胞浸潤。血清中GSTA1含量和活性顯著增加(P<0.01)，而肝臟中GSTA1含量和活性均顯著降低(P<0.01)。

6、>　　 2.以200 mg·kg-1劑量APAP灌胃，染毒12 h可成功復(fù)制小鼠急性肝損傷模型。模型組血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高，與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，肝組織中各指標變化與對照組相比均差異極顯著(P<0.01)，病理切片觀察到模型組肝組織充血、淤血，炎性細胞浸潤，肝索模糊，胞核固縮。血清中GSTA1含量和活性顯著增加(P<0.01)，而肝臟中GSTA1含量和活性均顯著降低(P<0.01)。
　　 3.以50%乙醇，按

7、14 mL·kg-1劑量灌胃，染毒8h可成功復(fù)制小鼠急性肝損傷模型。模型組血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高，與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，肝組織中各指標變化與對照組相比均差異極顯著(P<0.01)，病理切片觀察到模型組小鼠肝組織有圓形空泡、炎性細胞浸潤，肝細胞點狀壞死。血清中GSTA1含量和活性顯著增加(P<0.01)，而肝臟中GSTA1含量和活性均顯著降低(P<0.01)。
　　 本試驗成功復(fù)制急性化學(xué)性、藥物性、酒精性肝損傷動物