小鼠肝靜脈閉塞病模型的建立與評價研究.pdf

1、目的:利用野百合堿(monocrotaline，MCT)建立小鼠單純肝靜脈閉塞病(hepaticveno-occlusive disease，HVOD)模型，制定小鼠HVOD嚴(yán)重程度的評價指標(biāo)，對異基因骨髓移植移植（allogeneic bone marrow transplantation，allo-BMT）并發(fā)的肝損傷進行評價。
　　方法:將120只雄性BALB/c小鼠隨機分為6組，即正常對照組、野百合堿組(MCT組)、致死劑

2、量全身照射組（TBI組）、TBI移植組、白消安/環(huán)磷酰胺組（BU/CY組）、BU/CY移植組;MCT組即給予野百合堿灌胃，連續(xù)灌胃三天，在第3、4、6、8和10天收取標(biāo)本;TBI組在第7天收取標(biāo)本，BU/CY組在第0天收取標(biāo)本，TBI移植組和BU/CY移植組分別在給予TBI和BU/CY后第0天行異基因骨髓移植，移植后第15天收取標(biāo)本。觀察小鼠的一般狀況，稱取體重和肝重并計算肝臟指數(shù)，檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransf

3、erase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)總膽紅素水平(total bilirubin，TBIL)及活化血小板比例;檢測骨髓嵌合率、小鼠外周血白細(xì)胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞比例了解骨髓移植后造血重建情況;HE染色及電鏡觀察肝血竇變化及肝細(xì)胞損傷情況，免疫組織化學(xué)染色觀察肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(Liver sinusoidal endoth

4、elialcells，LSEC)變化，Masson染色觀察肝臟纖維化情況，綜合上述變化并參考大鼠HVOD評分標(biāo)準(zhǔn)，制定小鼠HVOD評分標(biāo)準(zhǔn)，對allo-BMT后肝臟損傷進行綜合評價。
　　結(jié)果:1.野百合堿特異性損傷肝竇內(nèi)皮，誘導(dǎo)HVOD模型建立BALB/c小鼠經(jīng)野百合堿連續(xù)灌胃3天后，其中有16只小鼠相關(guān)臨床及病理指標(biāo)符合HVOD診斷;2.依據(jù)Deleve大鼠評分標(biāo)準(zhǔn)及本實驗結(jié)果，制定出小鼠HVOD評分標(biāo)準(zhǔn)野百合堿誘導(dǎo)的小鼠HV

5、OD模型表現(xiàn)為輕、中度改變;3.TBI及BU/CY損傷肝竇內(nèi)皮，破壞肝功能小鼠經(jīng)TBI或BU/CY預(yù)處理后，肝功能各項指標(biāo)均升高，光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡觀察見肝細(xì)胞壞死、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、脫落;4.異基因骨髓移植并發(fā)中至重度HVOD BALB/c小鼠經(jīng)TBI、BU/CY預(yù)處理后，行異基因骨髓移植，在移植后第15天出現(xiàn)腹水、肝指數(shù)增加及肝功能受損，符合肝靜脈閉塞病的臨床表現(xiàn);病理組織學(xué)觀察及肝臟超微結(jié)構(gòu)觀察提示肝竇內(nèi)皮細(xì)胞受損、血小板粘附