血清饑餓處理對人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞自噬的調(diào)控效應(yīng)研究.pdf

1、細(xì)胞的自穩(wěn)是通過對細(xì)胞內(nèi)成分合成和降解的精確調(diào)節(jié)而實現(xiàn)。細(xì)胞內(nèi)降解物質(zhì)的途徑有兩類，一類是蛋白酶體途徑，主要降解短壽命蛋白質(zhì)，還有一類就是自噬途徑，主要降解長壽命蛋白質(zhì)及細(xì)胞器。自噬存在于所有的真核細(xì)胞中，它對于保持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定很重要。自噬可分為三類:巨自噬(macroautophagy)、微自噬(mieroautophagy)和分子伴侶介導(dǎo)的自噬(chap ronemediated autophagy)。巨自噬是胞漿內(nèi)成份進(jìn)行循環(huán)的

2、主要途徑，通常所說的自噬就是指巨自噬。饑餓是細(xì)胞自噬最為重要的誘導(dǎo)因素，然而目前饑餓對角質(zhì)形成細(xì)胞自噬調(diào)控效應(yīng)的研究資料較為缺乏。
　　 目的：研究血清饑餓處理對人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞自噬的調(diào)控效應(yīng)，并初步分析其分子機(jī)制，進(jìn)而為通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的自噬水平控制和治療皮膚病打下基礎(chǔ)。
　　 方法：對體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞進(jìn)行血清饑餓處理，使用透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變，使用westem-blot方法進(jìn)行自噬標(biāo)志性分子LC

3、3Ⅱ蛋白表達(dá)分析，進(jìn)而對mTOR的蛋白表達(dá)及其ser2448位點(diǎn)磷酸化產(chǎn)物水平進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：電鏡觀察發(fā)現(xiàn)血清饑餓處理的細(xì)胞中有自噬體囊泡形成;western-blot顯示LC3Ⅱ蛋白表達(dá)較正常培養(yǎng)的細(xì)胞顯著上調(diào)。血清饑餓處理的細(xì)胞中mTOR的ser2448位點(diǎn)磷酸化產(chǎn)物水平顯著降低。
　　 結(jié)論：血清饑餓處理可以誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞發(fā)生自噬，并且這種自噬活性的誘導(dǎo)可能與自噬調(diào)控關(guān)鍵元件mTOR的ser2448位點(diǎn)