腓骨肌萎縮癥PMP22、CX32、MFN2基因突變檢測及CX32功能研究.pdf

1、背景及目的:
　　 腓骨肌萎縮癥（Charcot-Marie-Tooth disease，CMT），又稱遺傳性運動感覺性神經(jīng)病(Hereditary motorsensory neuropathy，HMSN)，是一組最常見周圍性基因遺傳病。CMT1型約占CMT總數(shù)的50％，其中以PMP22基因大片段串聯(lián)重復突變所致CMT1A最常見，占CMT1型的70％。CMT2型主要遺傳方式為常染色體顯性遺傳，占CMT的20％～40％左右，其中

2、最常見類型為MFN2基因突變導致的CMT2A型，約占CMT2型的8％～33.3％。CMTX型在所有CMT型患者中所占比例約為10％～15％，CMTX中最常見的為顯性遺傳CMTX，即CMTX1型，由CX32基因突變導致，占了CMTX型中近90％。至今CMT已50個位點及30多個基因被定位，研究發(fā)現(xiàn)CMT并不具有很好的基因-表型相關性，即使是同一家系內(nèi)同一基因突變導致的不同患者臨床表現(xiàn)均不完全一致。在CMT疾病診斷方面，系統(tǒng)、方便有效的基因

3、診斷流程的建立非常必要。本課題針對CMT最常見致病基因PMP2、CX32、MFN2展開突變篩查工作，同時構建CX32(c.65G＞A)質(zhì)粒驗證點突變對CX32功能表達的影響。
　　 方法:
　　 1.利用擴增3.6kb大小包含1.7kb交換熱點區(qū)域的PMP22基因重復特異REP連接片段的PCR-雙酶切方法檢測70例先證者。
　　 2.取34例通過等位基因特異性PCR及實時熒光定量PCR檢測排除PMP22大片段重復

4、突變、無男傳男遺傳方式的先證者行CX32基因PCR-直接測序篩查檢測。
　　 3.取23例臨床表現(xiàn)、電生理或病理活檢結果符合CMT2型診斷標準的患者行MFN2基因PCR-直接測序篩查檢測。
　　 4.構建CX32(c.65G＞A)的pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32質(zhì)粒，轉染入Hela細胞初步研究CX32功能表達。
　　 結果:
　　 1.篩查出1例PMP22大片段重復突變陽性

5、家系，1例PMP22大片段缺失突變家系。
　　 2.篩查出6個CMT家系中發(fā)現(xiàn)5個CX32基因突變:c.37G＞A、c.65G＞A、c.246C＞G、c.256A＞G和c.533A＞G。其中c.246C＞G和c.533A＞G暫未見報道。CMT患者中CX32基因突變率為9％。
　　 3.篩查出MFN2基因兩雜合突變位點c.280C＞T及c.395G＞A。其中c.395G＞A暫未見報道。CMT2型患者中MFN2基因突變率為8

6、％。
　　 4.成功構建 CX32(c.65G＞A)的 pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32質(zhì)粒，并瞬時轉染入Hela細胞。
　　 結論:
　　 1.PMP22基因重復特異REP連接片段的PCR-雙酶切方法作為一線篩查PMP22基因大片段突變有待考究。
　　 2.CX32及MFN2基因可通過PCR-直接測序法行基因突變篩查，本研究篩查此兩基因突變率與國外報道一致。其中CX32基因