兔-人嵌合型抗HEV IgM質(zhì)控物及耐RNase病毒樣顆粒的雙質(zhì)粒雙表達研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：本研究擬用化學(xué)交聯(lián)方法構(gòu)建一種兔-人嵌合型戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus，HEV)IgM抗體作為抗-HEV IgM檢測質(zhì)控物。 方法:基因重組蛋白NE2作為抗原免疫家兔，獲得兔抗-HEV IgG，酶免方法檢測其滴度和活性后，蛋白A親合層析純化IgG，十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-P

2、AGE)分析IgG純度，紫外分光光度計測定260/280nm吸光度并計算抗體濃度。EDC(1-ethyl-3-[3-dilnethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride，1-乙基-3[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺)交聯(lián)兔抗-HEV IgG與人IgM?？?HEV IgM酶聯(lián)免疫測定(enzyme-linkedimmunosorbent astray,ELISA)試劑盒同時檢測嵌合抗體和陽性血清，

3、并比較兩者滴度。嵌合抗體稀釋后，放置于不同溫度條件下，保存不同時間后，ELISA檢測穩(wěn)定件。 結(jié)果:未純化的兔抗-HEVIgG滴度為1:100，000，純化后，SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示輕鏈和重鏈兩條帶(25kD和50kD)，沒有雜帶，達到電泳純，抗體濃度達10mg/ml。嵌合抗體與人抗-HEV IgM陽性血清滴度均為1:160，說明其同抗原的親和性與真實的人類樣本相似。穩(wěn)定性實驗表明，此嵌合抗體在室溫、4℃可至少保存兩個月，

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