木瓜提取物對(duì)脂肪性肝纖維化小鼠的預(yù)防保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：利用高脂飲食聯(lián)合腹腔注射豬血清建立小鼠脂肪性肝纖維化模型，在此模型的基礎(chǔ)之上，研究木瓜提取物對(duì)小鼠肝臟的預(yù)防保護(hù)作用，初步探究其抗脂肪性肝纖維化的作用機(jī)制。
　　方法：取雌雄各半的BABL/C小鼠48只，4-6周齡，將其隨機(jī)分為四組，每組12只，即正常對(duì)照組，模型組對(duì)照組，木瓜提取物低（100mg·kg-1）、高（300mg·kg-1）劑量組。除了正常對(duì)照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂飼料造模，與此同時(shí)，木瓜提取物低、

2、高劑量組分別給予100mg·kg-1、300mg·kg-1木瓜提取物灌胃，持續(xù)10周。除了正常對(duì)照組以外，其余各組小鼠均從第五周開始腹腔注射豬血清，持續(xù)3周。末次給藥并禁食12h后，稱取并記錄小鼠最終的體重，將其處死。(1)每周記錄上述各組小鼠的體重，每日觀察并記錄小鼠飲食、飲水量，行為及形態(tài)變化，處死后，觀察并記錄肝臟組織的形態(tài)和重量變化。(2)測(cè)定小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的活性和甘油三酯（

3、TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、總膽汁酸（TBA）的含量。(3)采用羥脯氨酸試劑盒檢測(cè)肝組織羥脯氨酸的含量。(4)小鼠肝臟HE染色，光鏡下觀察肝臟的病理學(xué)變化。(5)小鼠肝臟Masson染色法，光鏡下觀察肝組織的纖維化嚴(yán)重程度。(6)小鼠肝臟電鏡觀察肝組織的超微結(jié)構(gòu)的變化。(7)PCR技術(shù)觀察木瓜提取物對(duì)肝組織COL1A1、TIMP-1、α-SMA、IRE1、ATF6及eIF2α基因表達(dá)的影響。(8)Wester

4、n Blot技術(shù)觀察木瓜提取物對(duì)肝組織COL1A1、IL-1β、TNF-α、GRP78、JNK、p-JNK、GSK-3β、p-GSK-3β、p-AMPK、SIRT1、SIRT3及PGC-1α蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：(1)與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組均能顯著地升高小鼠每日攝食量、飲水量、每周體重、終體重、凈增長(zhǎng)體重、體重增長(zhǎng)率、肝重及肝指數(shù)，說明模型成功，木瓜提取物低、高劑量組均能改善小鼠的一般情況；肝臟取材外觀觀察比較發(fā)現(xiàn)模型

5、對(duì)照組相較于鮮紅、表面光滑無顆粒、界限清晰的正常對(duì)照組，其色淺偏白、表面粗糙有細(xì)小白色顆粒，木瓜提取物低、高劑量組小鼠肝臟外觀有明顯改善，接近于正常。(2)血清肝功能檢測(cè)中，木瓜提取物低、高劑量組均能在一定程度上降低ALT、AST的活性和TG、LDL、TBA的含量（P<0.05），升高HDL的含量（P<0.05）。(3)木瓜提取物低、高劑量組的肝組織中羥脯氨酸含量明顯減少（P<0.05）。(4)HE染色光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，木瓜提取物低、高劑

6、量組小鼠肝臟小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索排列較整齊，在中央靜脈周圍呈放射狀排列，肝細(xì)胞脂肪變性和炎性細(xì)胞的數(shù)量均顯著減少。(5)Masson染色光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，木瓜提取物低、高劑量組明顯的抑制了膠原纖維的產(chǎn)生，僅見少量的或者細(xì)小的藍(lán)色纖維穿梭在小血管周圍。(6)投射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，木瓜提取物低、高劑量組的肝細(xì)胞中脂滴明顯減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器數(shù)量增多。(7)木瓜提取物低、高劑量組可以明顯的降低COL1A1、TIMP-1、α-SMA、IRE1、

7、ATF6及eIF2α基因的表達(dá)。(8)木瓜提取物低、高劑量組能明顯的降低COL1A1、IL-1β、TNF-α、GRP78、p-JNK、p-GSK-3β蛋白的表達(dá)和升高GSK-3β、p-AMPK、SIRT1、SIRT3及PGC-1α蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.高脂飲食（10周）聯(lián)合腹腔注射豬血清（3周）可建立穩(wěn)定的小鼠脂肪性肝纖維化模型，本方法成熟可靠，簡(jiǎn)單易行；
　　2.木瓜提取物可改善脂肪性肝纖維化小鼠的肝功能