復(fù)方黃芪提取物抗肝纖維化作用機(jī)制的研究.pdf

1、慢性肝炎是我國(guó)的常見(jiàn)病，威脅著很多人的健康，大多數(shù)患者會(huì)發(fā)展成肝纖維化或肝硬化。肝纖維化(Hepatic fibrosis，HF)是多種慢性肝病病情發(fā)展的共同病理基礎(chǔ)，肝臟纖維組織的過(guò)度沉積的結(jié)果。近年來(lái)研究證實(shí)，肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell，HSC)的活化和向肌成纖維細(xì)胞(Myofibroblast，MFB)轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致大量細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)的合成，另一方面細(xì)胞外基質(zhì)

2、的降解減少導(dǎo)致其合成與降解的不平衡，是肝纖維化發(fā)生的病理關(guān)鍵。TGF-β<,1>是肝纖維化過(guò)程中發(fā)揮重要作用，目前研究認(rèn)為T(mén)GF-β<,1>信號(hào)經(jīng)由Smad途徑轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞核內(nèi)調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄從而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。 復(fù)方黃芪提取物(compotmd astragalus extract，簡(jiǎn)稱(chēng)CAE)是本室根據(jù)中藥現(xiàn)代化組合的復(fù)方黃芪有效部位群，研究已證實(shí)CAE具有活血化淤、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗肝損傷和抗肝纖維化等作用和抑制HS

3、C增殖、膠原合成、促凋亡、抑制NF-кB活性等機(jī)制。我們?cè)诖嘶A(chǔ)上，采用免疫吸附和Western印記分析等分子生物學(xué)方法，進(jìn)一步研究CAE抗肝纖維化的作用的細(xì)胞和分子信號(hào)機(jī)制，主要內(nèi)容概括如下： 1．CAE抑制HSO來(lái)源的MFB細(xì)胞增殖作用利用MFB細(xì)胞，采用MTT法，建立了血清和細(xì)胞因子(TGF-β<,1>)體外刺激MFB細(xì)胞增殖的模型。研究了CAE體外抑制MFB細(xì)胞增殖的量效和時(shí)效關(guān)系。 結(jié)果顯示：(1)CAE(10

4、、20、40、80、160mg/L)呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性地抑制由lO％NBS誘導(dǎo)的MFB細(xì)胞增殖。(2)CAE(10、20、40、80、160mg/L)呈濃度依賴(lài)性抑制TGF-β<,1>(9pmol/L)誘導(dǎo)的MFB細(xì)胞增殖。提示：CAE體外能明顯抑制MFB細(xì)胞的活化。 2．OAE對(duì)TGF-β<,1>誘導(dǎo)的MFB細(xì)胞移行浸潤(rùn)的影響我們通過(guò)體外模擬正常Disse間隙的微環(huán)境及肝纖維化時(shí)的相關(guān)改變，采用細(xì)胞移行實(shí)驗(yàn)方法，觀(guān)察肝纖維化時(shí)

5、致纖維化生長(zhǎng)因子TGF-β<,1>對(duì)MFB細(xì)胞移行的影響。 結(jié)果顯示：TGF-β<,1>可促進(jìn)MFB細(xì)胞侵襲能力，而CAE可抑制TGF-β<,1>誘導(dǎo)的MFB細(xì)胞的侵襲能力。提示：肝纖維化時(shí)Disse間隙微環(huán)境的改變促進(jìn)了MFB細(xì)胞的移行，CAE抑制肝纖維化的作用可能與其抑制MFB細(xì)胞移行的作用有關(guān)。 3．CAE抑制HSC來(lái)源的MFB細(xì)胞的Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)采用免疫吸附和Western blot方法，觀(guān)察CAE對(duì)TGF-β

6、<,1>誘導(dǎo)的MFB細(xì)胞內(nèi)pSmad2C，pSmad2L，pSmad3L及Smad2/3蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：(1)TGF-β<,1>(0.33、1、3、9pmol/L)呈濃度依賴(lài)性刺激MFB細(xì)胞內(nèi)Smad2C，Smad2L，Smad3L磷酸化；TGF-β<,1>(9pmol/L)在5～30min孵育時(shí)間，呈時(shí)間依賴(lài)性刺激MFB細(xì)胞內(nèi)Smad2C，Smad2L，Smad3L磷酸化。(2)TGF-β<,1>(9pmol/L)在30mi