慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰濕證模型的初步建立與評(píng)價(jià).pdf

1、慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種以氣流受限不完全可逆為特征的疾病,其發(fā)病率高、致殘率高、致死率高、社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)沉重,嚴(yán)重威脅人類健康。本課題初步探索符合中醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論的慢性阻塞性肺病急性加重期(acute exacerbationof chronic obstructive pulmonary diseases,AECOPD)大鼠痰濕證動(dòng)物模型的制備方法和條件,

2、通過(guò)大鼠肺功能、細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)等變化來(lái)初步探討中藥對(duì)其作用機(jī)制,從而為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　目的:成功建立AECOPD痰濕證大鼠模型;通過(guò)方證對(duì)應(yīng)和非對(duì)應(yīng)干預(yù),來(lái)初步探討中藥對(duì)AECOPD痰濕證大鼠模型的作用機(jī)制。
　　方法:大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組:wistar大鼠98只,將動(dòng)物隨機(jī)分為7組:對(duì)照組、痰濕證組、COPD穩(wěn)定期組(穩(wěn)定組)、AECOPD組(急性組)、AECOPD痰濕證組(模型組)、AECOPD痰濕證方

3、證對(duì)應(yīng)組(對(duì)應(yīng)組)、AECOPD痰濕證方證非對(duì)應(yīng)組(非對(duì)應(yīng)組)。①COPD穩(wěn)定期大鼠模型建立:穩(wěn)定組、急性組、模型組、對(duì)應(yīng)和非對(duì)應(yīng)組,以上各組經(jīng)鼻注入濃度為6x108CFU/ml的肺炎克雷伯桿菌菌液,同時(shí)進(jìn)行被動(dòng)香煙吸入,共12w,建立COPD穩(wěn)定期大鼠模型;②AECOPD大鼠模型建立:于13w的第4天,急性組、模型組、對(duì)應(yīng)和非對(duì)應(yīng)組,經(jīng)鼻滴入濃度為18x1016CFU/ml的肺炎克雷伯桿菌菌液,于開始滴菌后4天造成AECOPD大鼠模型

4、;對(duì)照組和痰濕證大鼠不進(jìn)行以上滴菌和煙熏處理。③痰濕證與病證結(jié)合模型的建立:痰濕證組、模型組、對(duì)應(yīng)和非對(duì)應(yīng)治療組均分別從第12w開始寒冷環(huán)境中進(jìn)行刺激持續(xù)造成痰濕證證候;其余各組在室溫(26±1℃)下飼養(yǎng)。④中醫(yī)經(jīng)典方劑反證:對(duì)應(yīng)和非對(duì)應(yīng)組從第14w開始分別采用二陳湯和三子養(yǎng)親湯(含0.61g生藥/ml)、葶貝膠囊(0.476g·Kg-1·d-1)灌胃;其余各組給予室溫下的蒸餾水(26±1℃)灌胃。
　　結(jié)果:1.大鼠體溫的變化<

5、br>　　大鼠體溫結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組、痰濕證組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠體溫均顯著降低(P<0.05);急性組、對(duì)應(yīng)組與穩(wěn)定組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比,模型組、痰濕證組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠體溫均顯著降低(P<0.05),急性組、對(duì)應(yīng)組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　2.各組大鼠外周血WBC計(jì)數(shù)及GRA％的變化
　　

6、各組大鼠外周血WBC計(jì)數(shù)及GRA%的結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組、急性組、非對(duì)應(yīng)組、痰濕證組WBC計(jì)數(shù)、GRA%顯著增高(P<0.01),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組WBC計(jì)數(shù)和GRA%無(wú)明顯差別(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,急性組、痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組顯著升高(P<0.01),對(duì)應(yīng)組無(wú)明顯差別(P>0.05);與急性組比較,模型組、非對(duì)應(yīng)組升高(P<0.05),對(duì)應(yīng)組降低(P<0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模

7、型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　3.各組大鼠BALF及血清細(xì)胞因子的變化
　　3.1.支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中TNF-a、IL-8變化
　　BALF中TNF-a、IL-8結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組、急性組、非對(duì)應(yīng)組、痰濕證組BALF中TNF-a、IL-8計(jì)數(shù)顯著增高(P<0.01),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組BALF中TNF-a、IL-8計(jì)數(shù)無(wú)明顯差別(P>0.

8、05);與穩(wěn)定組比較,模型組、急性組、痰濕證組、非對(duì)應(yīng)組顯著升高(P<0.05),對(duì)應(yīng)組無(wú)明顯差別(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　3.2.BALF中ICAM-1變化
　　BALF中ICAM-1結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組、對(duì)應(yīng)組各組大鼠BALF中ICAM-1明顯升高(P<0.05),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組大鼠血漿中ICAM-1無(wú)顯

9、著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組大鼠BALF中ICAM-1明顯升高(P<0.05),對(duì)應(yīng)組大鼠BALF中ICAM-1無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　3.3.血清中TNF-a、IL-8、CRP變化
　　血清中TNF-a、IL-8、CRP結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠血清

10、中TNF-a、IL-8、CRP明顯增高(P<0.05,P<0.01),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,急性組、模型組、痰濕證組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠血清中TNF-a、IL-8、CRP明顯增高(P<0.05,P<0.01),對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　4.甲狀腺軸和腎上腺素中相關(guān)指標(biāo)變化
　　4.1.血清FT3、F

11、T4變化
　　血清中FT3、FT4結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠血清FT3、FT4明顯降低(P<0.05,P<0.01),急性組、穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組大鼠血清FT3、FT4明顯降低(P<0.05,P<0.01),對(duì)應(yīng)組大鼠無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　

12、4.2.血清Cor變化
　　血清Cor結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠血清Cor明顯升高(P<0.05),加重組、穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組大鼠血清Cor明顯升高(P<0.05),對(duì)應(yīng)組大鼠血清Cor無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　4.3.血清腎上腺素(E)變化

13、
　　血清E結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠血清E明顯降低(P<0.05,P<0.01),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組大鼠血清E明顯降低(P<0.05,P<0.01),對(duì)應(yīng)組大鼠無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　4.4.血清去甲腎上腺素(NE)變化
　

14、　血清NE結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、加重組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠血清NE明顯升高(P<0.05),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對(duì)應(yīng)組大鼠血清NE明顯升高(P<0.05),對(duì)應(yīng)組大鼠無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　5.大鼠肺功能指標(biāo)變化
　　5.1.大鼠呼吸頻率(f)變化
　　大

15、鼠f結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠f明顯加快(P<0.05,P<0.01),穩(wěn)定組、對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　5.2.大鼠吸氣阻力(Rin)變化
　　大鼠Rin結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、穩(wěn)定組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組、對(duì)應(yīng)組各組大鼠Rin明顯升高(P<0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組

16、、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組大鼠Rin明顯升高(P<0.05),對(duì)應(yīng)組大鼠Rin無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　5.3.大鼠MV、Vt和PEF變化
　　大鼠MV、Vt和PEF變化結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,痰濕證組、穩(wěn)定組、急性組、模型組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠MV、Vt和PEF明顯降低(P<0.05,P<0.01),對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與

17、穩(wěn)定組比較,急性組、模型組、痰濕證組、非對(duì)應(yīng)組各組大鼠MV、Vt和PEF明顯降低(P<0.05,P<0.01),對(duì)應(yīng)組無(wú)顯著差異(P>0.05);與非對(duì)應(yīng)組比較,對(duì)應(yīng)組顯著改善(P<0.05),模型組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　6.大鼠肺組織病理變化
　　普通病理形態(tài)學(xué)觀察,對(duì)照組大鼠為正常肺組織;COPD穩(wěn)定期組大鼠支氣管炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,見局灶性肺泡隔破壞,多個(gè)肺泡相互融合形成肺氣腫;AECOPD組除COPD穩(wěn)定期

18、組所見外,部分肺實(shí)變,小動(dòng)脈周圍水腫明顯,小動(dòng)脈管壁較明顯增厚;痰濕證組大鼠杯狀細(xì)胞增多,粘膜層、粘膜下層大量炎細(xì)胞浸潤(rùn);AECOPD痰濕證組除AECOPD組所見外,大鼠氣管上皮細(xì)胞破壞明顯,支氣管平滑肌增厚,管腔堵塞,部分肺實(shí)變;AECOPD痰濕證對(duì)應(yīng)組較AECOPD組和AECOPD痰濕證組明顯減少;AECOPD痰濕證非對(duì)應(yīng)組病理改變與AECOPD痰濕證組比較加重。
　　結(jié)論:①本課題基于病證結(jié)合的現(xiàn)代中醫(yī)診療模式,在COPD發(fā)

19、病的中、西醫(yī)病因?qū)W理論指導(dǎo)下,成功復(fù)制了AECOPD痰濕證證大鼠模型。本模型的復(fù)制方法綜合了病和證的研制方法,運(yùn)用了與AECOPD痰濕證證的形成過(guò)程中較為密切的多種致病因素,符合AECOPD痰濕證證形成的條件和病機(jī)。②通過(guò)大鼠肺功能儀檢查、放免測(cè)定、普通病理等技術(shù),以多指標(biāo)、同時(shí)觀察的方法,對(duì)造模動(dòng)物進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)觀察及經(jīng)典中醫(yī)方劑反證,在癥狀表現(xiàn)方面,基本符合該病證的臨床表現(xiàn),微觀指標(biāo)如肺組織病理形態(tài)學(xué)、肺功能、炎癥因子等結(jié)果基本符合AE