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文檔簡介
1、人早孕滋養(yǎng)層細胞適當侵入子宮內(nèi)膜(植入)是成功妊娠的關鍵,滋養(yǎng)層細胞的侵入過程包含大量復雜的、彼此聯(lián)系的事件,受到嚴格的時空調(diào)控。滋養(yǎng)層細胞侵襲過度或不足均可導致病理性妊娠如先兆子癇、妊娠高血壓綜合征等疾病的發(fā)生。滋養(yǎng)細胞通過分泌蛋白酶類而獲得侵襲能力,基質(zhì)金屬蛋白酶是其中重要的一種,MMPs活性依賴于鋅、鈣離子,其主要的生理功能是降解細胞外基質(zhì)成分并重塑細胞外基質(zhì)。有研究指出:滋養(yǎng)細胞MMP-2和/或MMP-9表達水平的變化在調(diào)節(jié)滋養(yǎng)
2、細胞侵襲過程中起關鍵作用。雌、孕激素是調(diào)控妊娠早期滋養(yǎng)細胞侵襲性,以使胚胎正常植入并維持妊娠成功的關鍵因素,對其調(diào)節(jié)機制的研究,有助于更好的理解病理性妊娠并為滋養(yǎng)層侵襲性疾病的防治提供新的思路。氧分壓變化是妊娠早期顯著的特征性微環(huán)境,因此,具有細胞“氧感受器”樣效應的缺氧誘導因子(HIF),以及腺苷及其受體信號系統(tǒng)在細胞侵襲行為調(diào)控中的作用倍受關注,然而JEG-3細胞的相關研究尚未見報道?;诖?,本研究利用絨癌細胞腫瘤細胞系JEG-3細
3、胞作為滋養(yǎng)細胞模型,觀察分析體外模擬妊娠早期雌、孕激素環(huán)境條件下JEG-3細胞侵襲相關酶類的表達變化,以及腺苷受體信號通路在其侵襲性調(diào)節(jié)中的作用。 1.目的: 體外模擬妊娠早期母胎界面微環(huán)境,檢測雌、孕激素對絨癌細胞系JEG-3細胞形態(tài)、侵襲功能的影響及其機制,揭示母胎界面微環(huán)境中滋養(yǎng)層細胞侵襲行為的的分子基礎,為滋養(yǎng)層細胞疾病與雌激素、孕激素的關系提供進一步的理論依據(jù),從而有利于滋養(yǎng)層細胞疾病發(fā)病與治療的認識。
4、 2.方法: 2.1 JEG-3絨癌細胞的培養(yǎng)與收集; 2.2 倒置顯微鏡觀測JEG-3絨癌細胞形態(tài); 2.3 RT-PCR.檢測JEG-3絨癌細胞腺苷受體的表達; 2.4 Real time-PCR定量檢測JEG-3絨癌細胞腺苷受體A2bR表達; 2.5明膠酶譜檢測JEG-3細胞金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-2、MMP-9的分泌 3.結(jié)果: 3.1 雌、孕激素對JEG-3細胞形態(tài)無顯著性
5、影響(P<0.05) 3.2 JEG-3絨癌細胞表達MMP-2及MMP-9,雌、孕激素顯著上調(diào)JEG-3細胞MMP-2表達(P<0.05) 3.3 JEG-3絨癌細胞表達三種腺苷受體A1R,A2aR,A2bR,雌激素和/或孕激素條件下表達上調(diào)的基因是A2bR(P<0.05),A1R、A2aR的表達沒有顯著變化。 3.4 雌、孕激素影響JEG-3細胞A2bR mRNA表達,顯著升高兩倍(P<0.05) 3.
6、5 特異性阻斷A2bR通路JEG-3細胞分泌MMP-2顯著減少(P<0.05) 4. 結(jié)論: 4.1 雌激素、孕激素及雌孕激素聯(lián)合處理對JEG-3滋養(yǎng)細胞系形態(tài)均無顯著性影響。 4.2 JEG-3細胞表達MMP-2及MMP-9,但MMP-9的表達顯著弱于MMP-2,提示MMP-2可能是JEG-3細胞侵襲細胞外基質(zhì)的主要酶類。 4.3 絨癌細胞系JEG-3表達三種腺苷受體,雌激素和孕激素顯著上調(diào)腺苷受體A2
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