HOXB7基因?qū)θ橄侔┘毎礢KBR-3侵襲性的影響.pdf

1、目的:研究人類同源異型盒基因HOXB-7核心片段正義轉(zhuǎn)染乳腺癌細胞系SKBR-3后對其侵襲性的影響。 方法:從乳腺癌細胞系MCF-7中提取HOXB-7基因核心編碼區(qū)（HOXB7-CDS）片段，構(gòu)建含HOXB7-CDS片段的質(zhì)粒（PIRES2-EGFP-HOXB7）。采用半定量RT-PCR，Western blot印跡方法分別檢測乳腺癌細胞株SKBR-3的HOXB-7基因及成纖維細胞生長因子（bFGF）mRNA與蛋白質(zhì)表達水平。將

2、SKBR-3細胞分為3組：空白組、陰性對照組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PIRES2-EGFP）、HOXB-7正義轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染構(gòu)建質(zhì)粒PIRES2-HOXB7）。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率、RT-PCR、Western blot檢測轉(zhuǎn)染后HOXB-7和bFGF mRNA及蛋白表達。Transwell小室檢測3組細胞侵襲、運動能力的變化；明膠酶譜實驗檢測3組細胞上清及蛋白中中兩種基質(zhì)金屬蛋白酶活性；Western blot檢測細胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP

3、-2）變化。 結(jié)果: RT-PCR、Western blot結(jié)果顯示：HOXB7基因及bFGF因子在乳腺癌MCF-7細胞中陽性表達，在乳腺癌SKBR-3細胞中無表達，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒PIRES2-HOXB7到SKBR-3細胞后，該細胞表達HOXB-7基因；小室實驗和趨向運動實驗顯示轉(zhuǎn)染后細胞其侵襲力及趨向運動能力均上升；RT-PCR、明膠酶譜、Western blot結(jié)果顯示HOXB7正義轉(zhuǎn)染后，SKBR-3細胞MMP-2表達無明顯變化