人類(lèi)心臟發(fā)育相關(guān)的三個(gè)候選基因的克隆和功能研究.pdf

1、目前，心血管系統(tǒng)疾病已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康的疾病之一。為攻克這一頑癥，首先必須從機(jī)制上闡明其發(fā)病原因。在心血管系統(tǒng)疾病的研究中已發(fā)現(xiàn)，某些基因在時(shí)空上的表達(dá)紊亂可導(dǎo)致先天性心臟病，而對(duì)部分心血管系統(tǒng)病癥高發(fā)人群的研究也證明部分后天形成的心臟病與遺傳因素有關(guān)。我們研究室進(jìn)行的大規(guī)模篩選和克隆人類(lèi)心臟發(fā)育的相關(guān)基因工作為理解心臟發(fā)育的分子機(jī)理、探索心臟疾病發(fā)病的分子機(jī)制提供充實(shí)的理論基礎(chǔ)。
　　 為了確定人類(lèi)心臟發(fā)育的候選基因和

2、心臟疾病相關(guān)基因，我們從人類(lèi)心臟cDNA文庫(kù)中克隆了兩個(gè)人類(lèi)鋅指蛋白新基因，ZNF325和ANKZF1b以及一個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域蛋白基因AHNAKc。ZHF325和ANKZF1b分別位于位于染色體7p22和2q36.1，屬于Cys2/His2型鋅指蛋白家族。Northern雜交結(jié)果表明ZNF325在人類(lèi)胚胎各時(shí)期和成人各組織中都有廣泛的表達(dá)而在心臟中的表達(dá)有增強(qiáng)的趨勢(shì)。RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明ANKZF1b在人類(lèi)胚胎組織在心、腦、胃和腎特異性表

3、達(dá)。這表明ZNF325和ANKZF1b對(duì)心臟發(fā)育可能有著重要的作用。通過(guò)分別構(gòu)建到具有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞系，瞬時(shí)表達(dá)后熒光顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)ZNF325、ANKZF1b的編碼蛋白主要定位在細(xì)胞核。ZNF325和ANKZF1b分別在COS-7細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)時(shí)都抑制AP-1和SRE的轉(zhuǎn)錄活性。ZNF325轉(zhuǎn)錄活性的拆片分析和RNAi分析進(jìn)一步證明C2H2鋅指區(qū)域?qū)?bào)告基因AP-1和SRE起著重要的抑制作用。這

4、些表明ZNF325和ANKZF1b可能在MAPK信號(hào)途徑有著重要的作用。AHNAKc基因位于染色體11q12.2， AHNAKc通過(guò)構(gòu)建到與綠色熒光蛋白融合的真核表達(dá)載體pEGFP上，顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)AHNAKc表達(dá)的蛋白定位在細(xì)胞質(zhì)和核膜上。AHNAKc含有PDZ的結(jié)構(gòu)域，PDZ是一個(gè)在蛋白質(zhì)相互作用中起著重要作剛的基元，可能在細(xì)胞的信號(hào)途徑中有著重要作用。AHNAKa在心臟肌肉收縮中有著重要作用，因而研究它對(duì)心臟發(fā)育的影響是十分必要的