人類心臟發(fā)育候選新基因hnulp1的克隆與功能研究.pdf

1、堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix，bHLH)是真核生物中的一種特殊的轉錄因子，它們在神經(jīng)發(fā)生、肌細胞發(fā)生、心臟發(fā)育和血細胞發(fā)生、癌癥發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。hnu1p1就是本文作者在利用生物信息學方法篩選人類心臟發(fā)育候選基因的過程中發(fā)現(xiàn)的一個人類新基因。其cDNA全長2270個堿基，ORF全長2031個堿基，編碼一個長676個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。該蛋白包含一個bHLH和一個功能未知命名為DUF

2、654的結構域。在小鼠等物種中均發(fā)現(xiàn)了它的同源蛋白，并且它們之間具有極高的保守度，說明此蛋白所在的亞家族可能具有相當重要的功能。組織表達分析表明該基因在胚胎和成體中有不同的表達模式，且在成體心臟組織中有較高水平的表達。熒光素酶報道基因信號途徑分析表明，該蛋白作為一個轉錄抑制子對SRF信號途徑起著極強的抑制作用，并且該抑制作用通過新的未被鑒定功能的DUF654結構域表現(xiàn)出來。這些結果預示著人類bHLH轉錄因子HNULP1在心臟發(fā)育的晚期通

3、過SRF信號途徑對心臟發(fā)育起著重要的調(diào)控作用。
　　 同時，我們還通過酵母雙雜交實驗篩選到人類心臟特異性表達基因FHL2作為HNULP1的相互作用侯選蛋白。隨后，我們通過免疫共沉淀技術證明了其在細胞內(nèi)的相互作用。熒光共定位實驗結果表明HNULP1與FHL2共定位于細胞質(zhì)與細胞核中。熒光素酶報道基因分析表明FHL2對HNULP1的轉錄活性起到負調(diào)控作用。該實驗結果為進一步研究HNULP1在心臟發(fā)育中的功能，以及FHL2與HNULP