重度子癇前期與ERAP2基因多態(tài)性的相關性及血清中IL-32在其發(fā)病機制中的作用.pdf

1、妊娠期高血壓疾病是妊娠期最常見的合并癥，發(fā)病率全世界為3-4％，國外為5-10％（美國為5-7％），國內(nèi)9.4％。它是孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒致病率和病死率的主要原因。子癇前期是妊娠特異的疾病，臨床上表現(xiàn)為母親綜合癥（高血壓和蛋白尿，有或沒有多系統(tǒng)功能障礙）或胎兒綜合癥（胎兒生長受限，羊水過少和氧合異常）。其病因和發(fā)病機制仍然不清，雖然很多學者提出了不同的理論，但大多數(shù)沒有經(jīng)受住時間的考驗，目前比較公認的理論有：胎盤淺著床，凝血功能障礙，血管內(nèi)皮

2、細胞功能障礙，心血管適應不良，免疫失衡，基因易感性，營養(yǎng)過剩等。
　　 普遍認為妊娠期高血壓疾病是由于多個遺傳因素影響不同的易感基因或(和)同一易感基因的一個以上的相關位點以及與后天環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。血管內(nèi)皮細胞損傷則是妊娠高血壓疾病發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。
　　 2009年，Johnson MP 及其同事用GeneSniffer 程序查詢澳大利亞及挪威子癇前期病人的5q遺傳位點并分析了5q遺傳位點上的10個優(yōu)先候選基因。

3、該研究對澳大利亞家系的140個子癇前期病人（包括20個子癇病人）及90個對照組（血壓正常，沒有蛋白尿）的ERAP2 rs2549782位點和挪威家系1139位子癇前期病人及2269位對照組的ERAP2 rs17408150位點的分析發(fā)現(xiàn)這兩個多態(tài)位點跟子癇前期的基因易感性有相關性。他們認為這兩個位點分別可能損壞了 ERAP2 蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。報道發(fā)現(xiàn)ERAP2基因所編碼的酶跟血壓調(diào)節(jié)和原發(fā)性高血壓及先天性免疫和炎癥反應有關系。錯義的r

4、s2549782位點在高度保守的鋅結(jié)合 HEXXH(X)18E基序上與第二個谷氨酸并列。而這個基序是鋅結(jié)合性氨肽酶的顯著性特征并且對于酶的活性很重要。國內(nèi)尚無中國漢族人群子癇前期孕婦ERAP2基因多態(tài)性的研究。我們推測，ERAP2基因的多態(tài)性可能跟子癇前期發(fā)病的易感性有關。
　　 多數(shù)學者認為子癇前期中內(nèi)皮功能障礙可能是妊娠中過度的、不可控制的炎癥反應，以致炎性細胞因子增加。有資料顯示在有尿道炎和牙周炎的孕期女性更易患子癇前期。

5、早產(chǎn)、子癇前期、流產(chǎn)、胎兒不良結(jié)局均證實跟炎癥有關。由于炎癥被認為在子癇前期病理過程中發(fā)揮了重要作用，CRP，IL-6 這些因子已作為預測子癇前期的因子。但是，到底是哪個炎性因子觸發(fā)了炎癥反應仍然不清楚。
　　 IL-32作為一種新的炎癥性細胞因子，其與子癇前期的關系引起重視。這個因子可能跟動脈粥樣硬化，凝血以及癌癥和炎癥的內(nèi)皮因素有關。而子癇前期存在脂質(zhì)代謝紊亂、動脈粥樣硬化和內(nèi)皮細胞功能障礙。IL-32是否也參與了子癇前期的

6、發(fā)生發(fā)展？
　　 IL-32是 Soo-Hyun Kim等人利用生物芯片技術(shù)研究IL-18誘導高表達基因時從中發(fā)現(xiàn)的一個細胞因子樣基因。這一基因曾經(jīng)在1992年從IL-2活化的NK細胞中克隆，當時命名為NK4（natural killer cell transcript 4）。雖然IL-32跟其他細胞因子家族沒有序列同源性，但其能誘導淋巴細胞和單核細胞產(chǎn)生很多細胞因子，如TNF-α，IL-1β和IL-8等。Soo-Hyun Ki

7、m等人的工作證明IL-32為炎癥性的細胞因子，已經(jīng)在很多炎性疾病和癌癥中發(fā)現(xiàn)其發(fā)揮了重要作用，如類風濕性關節(jié)炎，炎性腸病，克羅恩病，胃癌及肺癌等。
　　 本課題采用分子生物學實驗技術(shù)分析正常妊娠和子癇前期患者ERAP2基因的SNP位點，以求探討基因多態(tài)性與子癇前期發(fā)病的相關性；同時應用免疫學實驗技術(shù)檢測正常妊娠和子癇前期患者血清中IL-32的濃度變化，探索炎性因子在子癇前期發(fā)病機制中的作用，為臨床早期預防、早期診斷、早期治療提供

8、理論依據(jù)。
　　 本研究分為以下兩部分，現(xiàn)分述如下：
　　 第一部分 ERAP2基因多態(tài)性與重度子癇前期的相關性
　　 目的:通過對子癇前期患者ERAP2基因SNP（rs2549782,rs1740150）分析，研究其跟子癇前期基因易感性的關系。方法:以35例重度子癇前期孕婦作為實驗組，41例同期分娩的正常孕婦作為對照組。用Qiagen DNA提取試劑盒提取DNA后，行PCR擴增目的條帶，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測并純

9、化后，由中國深圳華大基因公司測序，最后用Lasergene軟件查看SNP位點并用統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果:①重度子癇前期患者及正常妊娠組rs17408150位點均為T。②重度子癇前期患者rs2549782位點T的比率為37.14％，G的比率為62.86％；正常妊娠組rs2549782位點T的比率為34.15％，G的比率為65.85％，x2=0.074，P=0.786，OR值1.140，95％可信區(qū)間CI 為0.444-2.922。③在分

10、析rs17408150的過程中發(fā)現(xiàn)的新的SNP位點rs1423568（與rs17408150相差36個堿基）,其在重度子癇前期患者中T的比率為62.86％，C的比率為37.14％；正常妊娠組rs17408150位點T的比率為63.41％，C的比率為36.59％，x2=0.003，P=0.960，OR值1.024，95％可信區(qū)間CI為 0.402-2.609。結(jié)論: ERAP2基因SNP位點（rs2549782,rs1423568，rs1

11、7408150）在中國南方漢族人群中跟子癇前期的基因易感性關系可能沒有相關性。
　　 第二部分重度子癇前期患者血清中IL-32的研究
　　 目的:通過研究母血血清中IL-32的含量與子癇前期發(fā)病的關系，探討子癇前期的病因和發(fā)病機制。方法:以39例重度子癇前期孕婦作為實驗組，40例同期分娩的正常孕婦作為對照。用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測以上各組孕婦