TFPI-2在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：
　　本研究擬通過臨床研究分析正常妊娠和子癇前期孕婦孕婦和胎盤中TFPI-2的表達(dá)特點，從整體水平研究TFPI-2與子癇前期發(fā)病的關(guān)系；應(yīng)用RNAi和轉(zhuǎn)染技術(shù)下調(diào)/上調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞中TFPI-2基因表達(dá)水平，研究TFPI-2對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、分化、凋亡、侵襲等生物學(xué)行為的影響，從細(xì)胞水平研究TFPI-2在子癇前期發(fā)病中的作用。
　　方法：
　　本研究檢測正常非孕婦女、各孕周正常妊娠孕婦血清、產(chǎn)后母胎血清TFPI-2水平

2、和胎盤表達(dá)，與子癇前期比較差異。應(yīng)用時間分辨免疫熒光分析法和免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測。采用轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)、下調(diào)TFPI-2基因在滋養(yǎng)細(xì)胞株BeWo細(xì)胞表達(dá)后，評估細(xì)胞功能，包括boyden小室觀察運動、侵襲能力的變化，CCK-8法檢測增殖能力的變化，Hochest染色，TUNEL法和流式細(xì)胞周期法分析對細(xì)胞凋亡的影響，以及應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測人絨毛膜促性腺激素(β-hCG)水平評價分化功能，從而在體外實驗中確定TFPI-2基因?qū)ψ甜B(yǎng)細(xì)胞株Be

3、Wo細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響。
　　結(jié)果：
　　正常妊娠TFPI-2血清水平隨孕周增加而增加，孕39周達(dá)最大值(282.6±17.1ng/ml)，產(chǎn)后立即迅速下降至非孕水平(32.3±7.1ng/ml)，胎盤中呈現(xiàn)類似變化。子癇前期中TFPI-2血清水平隨孕周降低，胎盤表達(dá)增加且隨病情進(jìn)展增高。上調(diào)TFPI-2基因表達(dá)，BeWo細(xì)胞株體外遷移和侵襲能力略下降(p<0.05)；下調(diào)后其體外遷移和侵襲能力明顯增強(qiáng)(p<0.05)。各

4、組BeWo細(xì)胞株轉(zhuǎn)染2d，細(xì)胞活力明顯受抑制；4d-8d，隨著時間延長細(xì)胞活力增加。各時點上調(diào)TFPI-2細(xì)胞活力降低；下調(diào)后則顯著增加(p<0.05)。隨著TFPI-2基因表達(dá)增加，凋亡指數(shù)、TUNEL陽性率隨之上升(p<0.05)。TFPI-2基因表達(dá)對BeWo細(xì)胞株分泌β-hCG能力無明顯影響(p>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.胎盤是孕期TFPI-2重要來源。
　　2.TFPI-2對維持正常妊娠有重要作用。<

5、br>　　3.滋養(yǎng)細(xì)胞中TFPI-2表達(dá)抑制細(xì)胞侵襲、增殖能力，誘導(dǎo)凋亡，可能是子癇前期的病因之一。
　　創(chuàng)新點：
　　1.TFPI-2可能直接或間接影響滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲、增生、分化和凋亡等功能，造成子癇前期的發(fā)生，本研究首次具體報道其機(jī)制。
　　2.本課題通過臨床研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)象(子癇前期與TFPI-2有關(guān))；結(jié)合體外細(xì)胞生物學(xué)方法研究其機(jī)制(TFPI-2對滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響)，在整體和細(xì)胞水平驗證TFPI-2基因在