血管緊張素Ⅱ?qū)ε囵B(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞產(chǎn)生纖溶因子的影響及纈沙坦干預作用.pdf

1、背景:許多研究證明，腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)激活與缺血性心血管事件的危險性升高有關，且不依賴于對血壓的影響；相反，RAS被抑制，可減少左室功能不全病人心肌梗死(MI)的再發(fā)，減輕血管損傷后的內(nèi)膜肥厚及延緩動物模型中動脈粥樣硬化進展。纈沙坦作為血管緊張素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ，AngⅡ)受體拮抗劑(ARBs)，可抑制血管緊張素轉換酶(ACE)和非ACE依賴的相關反應，可更好的預防心血管事件的發(fā)生。AngⅡ是RAS的重要生物活性

2、肽，目前AngⅡ、纈沙坦對纖溶系統(tǒng)的影響尚不完全清楚，在不同細胞種屬中研究結果也不盡相同。 目的:探討AngⅡ?qū)ε囵B(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)分泌和表達組織型纖溶酶原激活物(tPA)及1型纖溶酶原激活物抑制劑(PAI-1)蛋白和mRNA水平的影響，以及纈沙坦的干預作用，從而揭示AngⅡ、纈沙坦與內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的tPA、PAI-1相互之間的關系，為纈沙坦臨床應用以提高纖溶活性提供更直接的實驗依據(jù)。 方法:用酶消化法收

3、集并培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)，將不同濃度的AngⅡ(10<'-6>、10<'-7>、10<'-8>、10<'-9>mol/L)與HUVECs共同9呼育12h；10<'-7>mol/L AngⅡ和HUVECs作用不同時間(0、2、6、12、24、48h)；10<'-7>mol/L AngⅡ和不同濃度的纈沙坦(10<'-5>、10<'-6>、10<'-7>、10<'-8>mol/L)與HUVECs作用12h；10<'-6>mol

4、/L纈沙坦與HUVECs作用12h。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)分別測定上清液中tPA、PAI-1蛋白的抗原濃度和二者在細胞中mRBA水平的表達。 結果:(1)上清液蛋白水平的研究：與對照組相比，10<'-9>～10<'-6>mol/LAngⅡ呈濃度依賴性升高HUVECs的PAI-1抗原水平，分別為[(138.70±9.82 vs85.67±8.53)ng/ml，P<0.01]、[(163

5、.28±11.04 vs 85.67±8.53)ng/ml，P<0.01]、[(211.00±9.34 vs 85.67±8.53)ng/ml，P<0.01]、[(220.82±8.10 vs 85.67±8.53)ng/ml，P<0.01]，10<'-7>mol/L AngⅡ達峰效應；10<'-7>mol/L AngII與HUVECs作用不同時間，PAI-1含量2h即與Oh比較有所升高[(34.10±5.63 vs 22.93±4.7

6、3)ng/ml，P<0.05]，12h達高峰[(198.08±7.85 vs 22.93±4.73)ng/ml，P<0.01]，并維持至24h，48h有所下降(與12h相比)[(178.08±7.19 vs 198.08±7.85)ng/ml，P<0.01]；10<'-8～10<'-5>mol/L纈沙坦呈濃度依賴性降低AngⅡ促HUVECs分泌PAI-1，分別為191.04±6.72 ng/ml、177.57±6.19 ng/ml、16

7、4.73±5.36 ng/ml、161.56±5.46ng/ml(與對照組比較，P均<0.01)，10<'-6>mol/L纈沙坦達峰效應；AngⅡ和纈沙坦對HUVECs分泌tPA沒有明顯影響。 (2)細胞mRNA水平的研究：10<'-9>～10<'-6>mol/L AngⅡ與HUVECs作用12h后，PAI-1 mRNA表達量顯著增加，分別為對照組的1.86±0.13(P<0.05)、4.06±0.39(P<0.05)、6.41±0.2

8、2(P<0.01)、6.46±0.12倍(P<0.01)，提示PAI-1 mRNA表達與AnglI濃度呈一定的依賴關系；10<'-7>mol/L AngⅡ與HUVECs作用2h、6h、12h、24h、48h，HUVECs的PAI-1 mRNA表達分別為基礎的1.73±0.10(P<0.05)、3.57±0.08(P<0.01)、7.30±0.44(P<0.01)、6.96±0.28(P<0.01)、6.40±0.24倍(P<0.01)，

9、12h處達峰值，并持續(xù)到48h；纈沙坦和AngⅡ聯(lián)合作用發(fā)現(xiàn)，10<'-8>～10<'-5>mol/L纈沙坦對固定濃度的AngⅡ誘導的PAI-1表達的拮抗作用呈濃度依賴性，PAI-1 mRNA的表達分別為對照組的4.82±0.35倍、3.49-0.32倍、2.32±0.25倍、2.21±0.21倍(P均<0.01)，表明此拮抗作用與纈沙坦的濃度呈一定的量效關系。而AngⅡ和纈沙坦對tPA的表達無明顯差異。 結論:AngⅡ通過促進