HIF-1α特異性干擾RNA抑制小鼠視網(wǎng)膜HIF-1α表達的研究.pdf

1、目的：通過基因沉默方法研究缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)特異性小干擾RNA(siRNA)重組質粒pSUPER<'siHIF-1α>對小鼠視網(wǎng)膜HIF-1α表達及視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法：(1)構建HIF-1α特異性siRNA重組質粒pSUPER<'siHIF-1α>。(2)選擇7d齡C57BL/6J小鼠48只，其中12只為正常組(A組)；另36只按照Smith<'[1]>的方法建立氧誘導的視網(wǎng)膜新生血管模型，并隨機分

2、為：對照組(B組)、空載體組(C組)和基因治療組(D組)，每組12只。于出艙前1d，向空載體組小鼠玻璃體腔注射pSUPER空載體質粒；基因治療組注射重組質粒pSUPER<'siHIF-lα>。(3)采用FITC-Dextran熒光造影視網(wǎng)膜鋪片觀察4組小鼠視網(wǎng)膜血管形態(tài)變化。(4)RT-PCR檢測各組視網(wǎng)膜組織中HIF-1αmRNA的表達水平。(5)SP免疫組織化學檢測各組間HIF-1α蛋白質的表達差異。 結果： (1)熒光造影

3、視網(wǎng)膜鋪片顯示，A組整個視網(wǎng)膜血管分布呈均勻網(wǎng)狀；B、C組視網(wǎng)膜中周部可見大片無灌注區(qū)，見新生血管叢，伴熒光滲漏；D組無灌注區(qū)及新生血管叢較B、C組明顯減少，視網(wǎng)膜血管網(wǎng)狀結構基本正常。(2)RT-PCR結果顯示，B、C組視網(wǎng)膜HIF-1αmRNA表達較A組明顯上調(diào)，而D組視網(wǎng)膜組織中HIF-1αmRNA表達較B組下調(diào)，抑制效率為57.1％，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。(3)免疫組織化學染色顯示，HIF-1α陽性表達定位于細胞核，