骨橋蛋白在內毒素致大鼠急性肺損傷中的作用研究.pdf

1、目的:采用尾靜脈注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立大鼠急性肺損傷(actue lung injury,ALI)模型,了解該模型肺組織勻漿中骨橋蛋白(osteopontin,OPN)表達水平以及OPN對脂多糖致大鼠急性肺損傷血清中TNF-α、IL-10、IFN-γ和IL-4表達水平的影響,從而探討OPN在脂多糖致大鼠急性肺損傷中所處的地位與作用。
　　 方法:
　　 1.將56只無特定病原體級雄

2、性SD(Sprague Dawley)大鼠,平均體重(200+10)g,按隨機數(shù)字表分為對照組8只、ALI組24只、干預組24只,其中ALI組和干預組2h、4h、8h各8只。用生理鹽水1ml經尾靜脈注入,5分鐘后再尾靜脈注人生理鹽水0.5ml/kg建立對照組；用LPS6mg/kg加生理鹽水至1ml經尾靜脈注入,5分鐘后再經尾靜脈注人生理鹽水0.5ml/kg建立大鼠ALI組；用LPS6mg/kg并加生理鹽水至1ml經尾靜脈注入,5分鐘后再

3、經尾靜脈注射濃度為1:32的Anti-OPN-Ab0.5ml/kg(參考文獻[1]Anti-OPN-Ab按1:32效價比用抗體稀釋液稀釋并每kg大鼠體重O.5ml應用)建立干預組；以上各組大鼠分別于2小時、4小時及8小時各處死8只。
　　 2.利用動脈血PaO2測定、肺濕重/干重比(wet/dry,W/D)測定、病理組織學檢查及肺損傷的評分等比較各組肺損傷的程度,并評價ALI模型的建立。
　　 3.酶聯(lián)免疫吸附(ELIS

4、A)法測定各組血清TNF-α、IL-10、IFN-γ和IL-4含量。
　　 4.免疫印跡法(Westernblotting)檢測各組肺組織勻漿中OPN表達水平,用OPN/β-actin(光密度比值)表示。
　　 結果:
　　 1.ALI組及干預組肺與NC組相比:肺濕重/干重比值、肺損傷評分、血清TNF-α濃度、血清TFN-γ濃度、血清IL-10濃度、血清IL-4濃度、TNF-α/IL-10比值、IFN-γ/IL-

5、4比值及肺組織勻漿OPN表達均顯著升高(P均<0.05),動脈血PaO2卻明顯降低；
　　 2.ALI組的肺W/D比值、肺損傷評分、血清IFN-γ濃度、血清IL-10濃度、血清IL-4濃度、TNF-α/IL-10比值、IFN-γ/IL-4比值及肺組織勻漿OPN表達在4小時顯著高于2小時及8小時(P均<0.05),但血清TNF-α濃度2小時升高最明顯(P均<0.05)；
　　 3.干預組肺W/D比值、肺損傷評分、血清TNF

6、-α濃度、血清IFN-γ,濃度、TNF-α/IL-10比值及IFN-γ/IL-4比值均顯著性降低(P均<0.05)；動脈血PaO2、血清IL-10濃度及血清IL-4濃度均顯著性升高(P均<0.05)；肺組織勻漿OPN表達卻無顯著性降低(P均>0.05)。
　　 結論:
　　 1.尾靜脈注射LPS能成功誘導大鼠ALI模型,4h時肺損傷最為明顯和典型。
　　 2.OPN在LPS致大鼠ALI肺組織中表達明顯增加。鼠AL