骨橋蛋白在內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷及損傷后肺纖維化中的作用.pdf

1、目的:通過觀察骨橋蛋白抗體(Anti-OPN-Ab)對內(nèi)毒素腹腔注射所致的SD大鼠急性肺損傷及損傷后肺纖維化肺組織中核因子-κB(NF-κB)及炎性細(xì)胞因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、干擾素γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、白細(xì)胞介素10(IL-10)表達(dá)水平的影響,探討骨橋蛋白在急性肺損傷及損傷后肺纖維化過程中的作用,進(jìn)一步闡明肺損傷的發(fā)病機制。
　　方法:通過腹腔注射內(nèi)毒素(LPS)建立大鼠急性肺損傷及損傷后肺纖維化

2、模型。60只清潔級雌性SD大鼠隨機分為3組,空白對照組(n=20,腹腔注射無菌生理鹽水NS),內(nèi)毒素模型組(n=20,腹腔注射 LPS,5mg/kg),干預(yù)組(n=20,腹腔注射 LPS,5mg/kg,5分鐘后再次腹腔注射骨橋蛋白抗體0.5ml,效價為1:32)。在隨機分為3組的基礎(chǔ)上又按3d、7d、14d、28d不同時間點隨機分為4組,在0d、1d、2d連續(xù)用藥3天,共3次,建立肺損傷后肺纖維化模型。各組大鼠按上述時間點處死,留取標(biāo)本

3、行相應(yīng)檢測。①留取右肺下兩葉行Masson染色及HE染色,了解肺組織鏡下病理變化情況。②右肺上兩葉免疫印跡(Western blotting)檢測肺組織勻漿細(xì)胞漿與細(xì)胞核NF-κB的表達(dá)。③雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELLISA)測定大鼠左肺肺組織勻漿炎癥細(xì)胞因子 TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、NS組大鼠肺組織HE染色光鏡下肺泡結(jié)構(gòu)正常,無破壞,無炎性滲出物,肺間隔無增寬及炎性細(xì)胞浸潤。內(nèi)毒素模型

4、組于3d組開始出現(xiàn)較重的炎癥反應(yīng)即肺泡結(jié)構(gòu)的破壞,肺泡腔閉陷融合,肺泡間隔斷裂,炎性細(xì)胞填充于肺泡腔及肺間質(zhì),并伴有出血、水腫,少許藍(lán)色膠原纖維開始沉積在炎癥較重的部位。7天組炎癥反應(yīng)仍然很重,炎性細(xì)胞滲出明顯,更多的藍(lán)色膠原纖維沉積,14d組炎癥反應(yīng)明顯減輕,28天時炎癥反應(yīng)較前進(jìn)一步減弱,但更多藍(lán)色膠原纖維出現(xiàn)在肺損傷部位。干預(yù)組上述病理表現(xiàn)均較內(nèi)毒素組減輕。2、內(nèi)毒素模型組及干預(yù)組大鼠肺組織勻漿細(xì)胞漿及細(xì)胞核NF-κB的表達(dá)在早期

5、就開始升高,與NS組比較具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)且3d、7d組升高最明顯,但細(xì)胞漿NF-κB的表達(dá)在內(nèi)毒素模型組與干預(yù)組之間無差異(p>0.05),而細(xì)胞核NF-κB的表達(dá)在兩者之間有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)。3、內(nèi)毒素模型組及干預(yù)組大鼠肺組織勻漿在早期就可以出現(xiàn)致炎因子TNF-α、IFN-γ升高,同細(xì)胞核NF-κB表達(dá)量的升高在時間上存在一致性,仍然以3d、7d組最為明顯,兩組與NS組比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.0

6、5, p<0.01)、后期炎性因子表達(dá)量逐漸減少,干預(yù)組在致炎因子TNF-α、IFN-γ表達(dá)量上較模型組有明顯下降(p<0.05,p<0.01)?？寡滓蜃覫L-4、IL-10在內(nèi)毒素組及干預(yù)組之間仍然較 NS組有明顯升高(p<0.05,p<0.01),且與內(nèi)毒素比較干預(yù)組升高更為明顯(p<0.05),但在14d時兩者之間無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　結(jié)論:多次小量腹腔注射LPS能夠成功復(fù)制急性肺損傷及損傷后肺纖維化模型,損傷