毛木耳種質(zhì)資源研究.pdf

1、毛木耳(AuriculariapolytrichaSacc)食、藥兼用，屬真菌門(mén)(Eumycota)，擔(dān)子菌亞門(mén)(Basidiomycotina)，異擔(dān)子菌綱(Heterobasidiomycetes),木耳目(Auriculariales)，木耳科(Auriculariaceae)，木耳屬(Auricularia)，是我國(guó)主要栽培食用菌之一，其栽培菌株耳片肥厚，柔軟可口，清脆鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，藥用性平，味甘，有益氣強(qiáng)身，活血，止血之功效

2、。由于生態(tài)環(huán)境日益惡化，野生毛木耳越來(lái)越少，人工栽培行業(yè)管理混亂，使得毛木耳品種退化現(xiàn)象日益加重，病蟲(chóng)害滋生極其普遍。因此，對(duì)毛木耳種質(zhì)資源進(jìn)行收集與保存以及研究與利用具有重要意義。本文從同工酶以及分子水平對(duì)毛木耳種質(zhì)資源進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并對(duì)供試菌株生產(chǎn)性能以及毛木耳在重金屬銅的吸收條件方面作了研究。主要結(jié)果如下： 1.采用垂直平板聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對(duì)毛木耳56個(gè)菌株酯酶同工酶的酶譜多樣性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，供試菌株有一定的遺

3、傳變異，檢測(cè)到遷移率不同的10條酶帶，各菌株分別具有1～6條酶帶，共有26種酶譜類(lèi)型。菌株被分成了8大群：第一群包括黃耳zh等34個(gè)菌株；第二群包括白背木耳等8個(gè)菌株；第三、第四群分別為黑木耳和915兩個(gè)單獨(dú)的菌株；第五群為99等4個(gè)菌株；第六群包括43等4個(gè)菌株；第七群包括50385和AP067兩個(gè)菌株；第八群包括小上3和雜交34兩個(gè)菌株。說(shuō)明酯酶同工酶分析技術(shù)是鑒別種及品種以下菌株的有效手段。 2.用22個(gè)隨機(jī)引物對(duì)來(lái)源不同

4、的56個(gè)木耳菌株進(jìn)行了RAPD分析。結(jié)果表明，所有引物的擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片斷均表現(xiàn)出明顯的多態(tài)性，供試菌株總共擴(kuò)增出164條多態(tài)性片段，占總擴(kuò)增片段的99％；供試菌株兩兩間遺傳相似系數(shù)變化較大(平均GS值0.2143～0.8764)。采用系統(tǒng)聚類(lèi)法中的類(lèi)平均法，對(duì)供試菌株兩兩間的相似系數(shù)進(jìn)行聚類(lèi)，可將其分為四大類(lèi)，各大類(lèi)的類(lèi)間和類(lèi)內(nèi)菌株的遺傳變異程度較大，以Ⅳ類(lèi)內(nèi)各菌株間的最高(平均GS值0.3891)，Ⅱ和Ⅲ類(lèi)間的最低(平均GS值0.5

5、887)，表明遺傳變異也較豐富(總平均GS值0.4918)。將RAPD技術(shù)應(yīng)用于不同菌株間遺傳差異的研究，具有反應(yīng)迅速、不受外界環(huán)境條件影響、能從DNA分子水平上揭示菌株間遺傳差異等優(yōu)點(diǎn)。是一種快速準(zhǔn)確評(píng)估木耳種質(zhì)資源的有效方法。 3.采用ISSR技術(shù)對(duì)55個(gè)木耳菌株進(jìn)行了檢測(cè)與分析。從27條ISSR引物中篩選出適合毛木耳種質(zhì)分析的17條ISSR引物。17條引物共擴(kuò)增出155條帶，多態(tài)性位點(diǎn)155；多態(tài)性位點(diǎn)比率100％?；跀U(kuò)

6、增條帶數(shù)據(jù)庫(kù)建立了Jaccard遺傳相似系數(shù)矩陣，構(gòu)建了相關(guān)的分子樹(shù)狀圖，將55個(gè)供試菌株分為5類(lèi)群：Ⅰ類(lèi)群含12個(gè)菌株，Ⅱ類(lèi)群含11個(gè)菌株，Ⅲ類(lèi)群含2個(gè)菌株，Ⅳ類(lèi)群含24個(gè)菌株，Ⅴ類(lèi)群含6個(gè)菌株。55個(gè)菌株的平均遺傳相似系數(shù)為0.4109，菌株間的遺傳多樣性十分豐富。ISSR能檢測(cè)到比RAPD更多的遺傳變異，ISSR標(biāo)記是一種多態(tài)性和重復(fù)性?xún)?yōu)于RAPD標(biāo)記的技術(shù)。 4.對(duì)毛木耳7個(gè)菌株rRNA基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間區(qū)(ITS)進(jìn)行了克隆

7、測(cè)序，并將其與木耳屬其它幾個(gè)種的相應(yīng)序列進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，在供試的7個(gè)毛木耳菌株中，除特大(209bp)外，其余6個(gè)菌株的ITS2區(qū)序列長(zhǎng)度完全相同，毛木耳rRNA基因的兩個(gè)ITS區(qū)序列有一定數(shù)量的堿基變異，整個(gè)ITS區(qū)共有11個(gè)變異位點(diǎn)。與下載的木耳屬另外4個(gè)種相比較，均有較大程度的變異，提示毛木耳rRNA基因的ITS區(qū)序列并不絕對(duì)保守。根據(jù)遺傳同源性分析、遺傳距離分析和系統(tǒng)樹(shù)上所顯示的供試菌株及相關(guān)已知種的親緣關(guān)系，ITS序列分

8、析支持傳統(tǒng)的依據(jù)形態(tài)學(xué)進(jìn)行的木耳屬分類(lèi)。 5.對(duì)57個(gè)菌株進(jìn)行了出菇試驗(yàn)，比較了它們的形態(tài)特征，出菇期早晚，產(chǎn)量情況。方差分析結(jié)果表明，57個(gè)菌株間產(chǎn)量差異顯著。其中，大光、035、黃耳zh、上海1號(hào)、雜交1號(hào)、915、特大、川7、913、紅大耳、雜交34、3039、黃10、AP7、AP6、719、ml、951、特大A系、781和臺(tái)耳319等21個(gè)菌株的產(chǎn)量高、菇形好、耳片厚而大，可以作為四川省推廣栽培的菌株應(yīng)用于生產(chǎn)。

9、 6.對(duì)毛木耳生物吸附Cu2+的情況進(jìn)行了研究，評(píng)價(jià)了影響吸附的溶液pH值，溫度，振蕩吸附時(shí)間，金屬初始濃度和菌絲體濃度。結(jié)果表明，pH值影響毛木耳的吸附能力隨溶液中初始Cu2+濃度的不同而不同；溫度的影響沒(méi)有明顯規(guī)律，以20℃時(shí)吸附能力最強(qiáng)；吸收15min時(shí)，毛木耳對(duì)Cu2+的吸附值達(dá)最高(1.379mgCu2+/g干菌絲粉)；隨著溶液初始Cu2+濃度的增加，吸附率增加，但隨菌絲體生物量的增加吸附能力下降，當(dāng)溶液Cu2+為60mg/L