JNK在缺血后處理減輕再灌注損傷肺細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的:
　　探討C-Jun氨基末端激酶(JNK)在缺血后處理(IPO)減輕缺血/再灌注損傷大鼠肺細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法:
　　1.把40只實(shí)驗(yàn)的雄性大鼠（體重200～250g）隨機(jī)分成5組(n=8)，即對(duì)照組(C組)、肺缺血/再灌注組(I/R組)、肺缺血/再灌注+缺血后處理組(IPO組)、肺缺血/再灌注+缺血后處理+溶劑對(duì)照組（PPCES溶液）（P組）、肺缺血/再灌注+缺血后處理+SP600125組（SP組）。按

2、8ml/kg體重腹腔注射20％烏拉坦麻醉。麻醉后氣管插管，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，行機(jī)械通氣，呼吸機(jī)參數(shù)設(shè)置為:潮氣量7-8ml/kg，呼吸頻率70b/min，吸呼比3∶2。消毒左胸部皮膚，分離筋膜和肌肉，斷開(kāi)第3、4根肋骨，打開(kāi)胸腔，暴露左肺，游離左肺門(mén)，動(dòng)脈夾夾閉30min，即為缺血期，松開(kāi)動(dòng)脈夾，即為再灌注期，再灌注時(shí)間為2h，如此即成功復(fù)制在體原位單肺缺血/再灌注模型;再灌注前給予連續(xù)的缺血30sec/再灌注30sec的處理共3次，結(jié)

3、束后再灌注2h，即為缺血后處理組。C組游離左肺門(mén)后不夾閉肺門(mén)，觀察2.5 h。SP600125用藥劑量為10mg/kg體重，將10mg SP600125溶于7.5mlPPCES溶液（30％聚乙二醇，20％聚丙烯乙二醇，15％聚氧乙烯蓖麻油，5％乙醇，30％生理鹽水）中[7]，使其充分溶解，缺血前尾靜脈注射入大鼠體內(nèi)。
　　2.實(shí)驗(yàn)后取頸動(dòng)脈血檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(Mal

4、ondialdehyde，MDA)、髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)等生化指標(biāo)的變化。
　　3.取肺組織測(cè)肺的濕/干重比(W/D)和總肺含水量(total lung water content，TLW)。
　　4.肺組織光鏡檢測(cè)肺泡損傷數(shù)定量評(píng)價(jià)指標(biāo)(index of quantitative evaluation foralveolar damage, IQA)。
　　5.肺組織電鏡檢測(cè)各標(biāo)本超

5、微結(jié)構(gòu)改變。
　　6.采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)肺組織凋亡情況，并計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)。
　　結(jié)果:
　　1.血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓過(guò)氧化物酶(MPO)的含量
　　與C組相比，I/R組血清SOD活性顯著降低(P＜0.01);MDA含量、MPO活力顯著升高(P＜0.01)， IPO組、P組、SP組與I/R組相比，MDA含量、MPO活力顯著降低，SOD活性升高(P＜0.05或P＜

6、0.01)，P組與IPO組比較兩者均無(wú)明顯差異（P均＞0.05），SP組與IPO組相比，MDA含量、MPO活力顯著降低，SOD活性升高(P＜0.01)。
　　2.肺組織濕/干重比(W/D)和總肺含水量(TLW)的變化
　　與C組相比，I/R組W/D和TLW均明顯升高(P＜0.01)，IPO組、P組、SP組與I/R組相比，W/D和TLW均明顯降低(P＜0.01)，IPO組與P組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，SP組與IPO

7、組相比，W/D和TLW均明顯降低(P＜0.05)。
　　3.光鏡下肺組織形態(tài)學(xué)的變化及肺泡損傷數(shù)定量評(píng)估(IQA)
　　與C組相比，IR組IQA顯著升高(P＜0.01);IPO組、P組、SP組與I/R組相比，IQA顯著降低(P＜0.01);IPO組與P組相比，IQA沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，二者之間沒(méi)有差別(P＞0.05);SP組與IPO組相比，IQA顯著降低(P＜0.01)（見(jiàn)表2）。光鏡下，C組肺間質(zhì)及肺泡結(jié)構(gòu)保持完整，未見(jiàn)炎性細(xì)

8、胞及紅細(xì)胞滲出;I/R組可見(jiàn)肺間質(zhì)增寬水腫，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，多個(gè)肺泡融合，肺泡內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)且有較多紅細(xì)胞滲出，偶可見(jiàn)肺部實(shí)性變;IPO組與P組肺泡損傷稍減輕，肺泡結(jié)構(gòu)略有紊亂，少量肺泡融合，肺泡內(nèi)炎細(xì)胞及紅細(xì)胞少量滲出;SP組肺間質(zhì)水腫不明顯，肺泡結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)肺泡融合，肺泡內(nèi)極少量炎性細(xì)胞及紅細(xì)胞滲出。
　　4.電鏡下肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化
　　C組內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞胞膜完整，核染色質(zhì)分布均勻，胞內(nèi)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核

9、清晰可見(jiàn)，未見(jiàn)核固縮、碎裂或溶解，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)板層小體含量豐富，線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)完整;I/R組各型細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)染色質(zhì)邊集，胞內(nèi)細(xì)胞器水腫，偶可見(jiàn)核固縮甚至碎裂、溶解，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛脫落，胞內(nèi)板層小體數(shù)量減少，空泡化明顯，胞內(nèi)線(xiàn)粒體腫脹、脊消失;IPO組和P組超微結(jié)構(gòu)損傷有所減輕，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛稍增多，板層小體數(shù)量尚可，未見(jiàn)明顯空泡化，胞內(nèi)線(xiàn)粒體稍有水腫、脊可見(jiàn);SP組各型細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，和染色質(zhì)分布均勻，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨

10、毛基本無(wú)脫落，胞內(nèi)板層小體數(shù)量接近C組，無(wú)空泡化，線(xiàn)粒體未見(jiàn)明顯水腫、脊清晰可見(jiàn)。
　　5.各組細(xì)胞凋亡情況及AI值的變化
　　與C組相比，I/R組凋亡指數(shù)顯著升高(P＜0.01)，P組、SP組、IPO組AI顯著低于I/R組（P均＜0.01），P組與IPO組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)，SP組顯著低于IPO組(P＜0.01)。凋亡細(xì)胞主要為肺泡上皮細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　結(jié)論:
　　I/R導(dǎo)致大鼠肺組織過(guò)度氧