血小板microRNA及其與CYP2C19-2的交互作用對(duì)ACS患者氯吡格雷抗血小板反應(yīng)性影響的研究.pdf

1、目的:本研究旨在以急性冠脈綜合征(ACS)患者為研究對(duì)象，擬探討microRNA(miRNA)的表達(dá)水平對(duì)氯吡格雷抗血小板反應(yīng)性的影響，并探究miRNA的表達(dá)水平和CYP2C19*2的交互作用對(duì)氯吡格雷的血小板反應(yīng)性的影響。
　　方法:連續(xù)募集2013年12月至2014年12月期間，在中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院心血管內(nèi)科住院的ACS患者。記錄臨床基本資料和各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)和檢查結(jié)果，并對(duì)冠脈造影結(jié)果進(jìn)行分析。采用光密度比濁法檢測(cè)血小板聚集

2、率，通過(guò)生物信息學(xué)分析篩選候選miRNA位點(diǎn)。利用CD45免疫磁珠去除白細(xì)胞后提取出血小板內(nèi)的miRNA，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time polymerase chain reaction，real time PCR反應(yīng))檢測(cè)與P2Y12受體相關(guān)miRNA的表達(dá)水平，并檢測(cè)CYP2C19*2和CYP2C19*3的SNP分型(single nucleotide polymorphisms)，隨訪1年觀察臨床心血管終點(diǎn)事件。采

3、用單因素和多因素分析方法，評(píng)價(jià)miRNA的表達(dá)水平與氯吡格雷抗血小板反應(yīng)性之間的相關(guān)性;采用受試者工作特征曲線(ROC曲線)對(duì)miRNA的表達(dá)水平對(duì)血小板反應(yīng)性的預(yù)測(cè)效能進(jìn)行分析;采用非條件Logistic回歸方法分析miRNA表達(dá)水平和CYP2C19*2等位基因變異型的交互作用。
　　結(jié)果:共募集符合標(biāo)準(zhǔn)的ACS患者272例，篩選出氯吡格雷治療前后均檢測(cè)了血小板聚集率的患者165例，篩選出符合條件的極端病例39例，并對(duì)這39例患

4、者完成了1年的臨床隨訪。將39例病例根據(jù)上述四分位數(shù)法分為兩組:高血小板反應(yīng)極端值組（高反應(yīng)組），21例;和低血小板反應(yīng)極端值組（低反應(yīng)組），18例。①兩組間的一般資料和臨床特征無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05），但兩組間的穩(wěn)定血小板聚集率(OTPA)和聚集率的差值(PA change)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(OTPA:24.14±24.35v.s.6.757±3.23,p＜0.001;PA change:39.78±61.43 v.s.90.07±4

5、.09,p＜0.001)。②根據(jù)生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)，篩選出三個(gè)候選microRNA，分別是:miR-223、miR-221和miR-21。③對(duì)三種候選miRNA的表達(dá)水平進(jìn)行PCR檢測(cè)的結(jié)果提示:高反應(yīng)組的三種miRNA的表達(dá)水平均高于低反應(yīng)組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(miR-223:p=0.002; miR-221: p=0.004; miR-21: p=0.007)。對(duì)miRNA與血小板聚集率進(jìn)行單因素相關(guān)分析時(shí)發(fā)現(xiàn):OTPA與miR-

6、221的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.440，p=0.034)，與miR-21的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.341，p=0.005); PA change與miR-221的表達(dá)水平也呈正相關(guān)(r=0.358，p=0.025)，與miR-21的表達(dá)水平也呈正相關(guān)(r=0.411，p=0.009)，但miR-223的表達(dá)水平與OTPA和PA change均無(wú)明顯相關(guān)性(p＞0.05）。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)心肌損傷標(biāo)記物cTnT的水平與miR-2

7、23的表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.424，p=0.034)。④根據(jù)ROC曲線分析結(jié)果得知:miR-223對(duì)血小板反應(yīng)性的檢驗(yàn)效能為:AUC=0.704，敏感度=70％，特異度=100％，95％ CI:0.528-0.880，p=0.030; miR-221對(duì)血小板反應(yīng)性的檢驗(yàn)效能為:AUC=0.762，敏感度=80％，特異度=62.5％，95％CI:0.613-0.911，p=0.005; miR-21對(duì)血小板反應(yīng)性的檢驗(yàn)效能為:AU

8、C=0.796，敏感度=88.9％，特異度=76.3％，95％CI:0.639-0.953，p=0.002。⑤將有可能影響氯吡格雷抗血小板反應(yīng)的多種臨床因素（如CYP2C19*2/*3等位基因多態(tài)性、年齡、吸煙、糖尿病、服用質(zhì)子泵抑制劑等）經(jīng)過(guò)校正后，采用多元回歸分析發(fā)現(xiàn)這三種miRNA均是高血小板反應(yīng)性的預(yù)測(cè)因子(miR-223:校正OR2.133，95％ CI:1.191-3.820，p=0.011;miR-221:校正OR1.13

9、3，95％ CI:1.027-1.250，p=0.013和miR-21:校正OR1.012，95％ CI:1.001-1.023，p=0.030)。⑥通過(guò)對(duì)miRNA的表達(dá)水平和CYP2C19*2變異型的交互作用的分析，在CYP2C19*2等位基因攜帶者中，高反應(yīng)組較低反應(yīng)組表達(dá)水平較高，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(miR-223: p=0.037; miR-221:p=0.001;miR-21:p＜0.001);但在CYP2C19*2非攜帶者間

10、的上述三種miRNA的表達(dá)水平差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05）。
　　結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)ACS患者服用氯吡格雷治療后血小板內(nèi)miRNA的高表達(dá)與高血小板反應(yīng)性之間存在正向相關(guān)性，miRNA的表達(dá)水平與CYP2C19*2變異型攜帶者的交互作用可能共同影響血小板反應(yīng)性。本研究為臨床研究冠脈疾病的診斷方法提供了新的分子水平的依據(jù)，認(rèn)為miR-223、miR-221和miR-21有可能成為評(píng)價(jià)ACS患者氯吡格雷抗血小板反應(yīng)性的潛在預(yù)測(cè)標(biāo)志