主動脈瓣狹窄患者血漿和心肌CTRP3與心肌纖維化的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：嚴重主動脈瓣狹窄(Aortic valve stenosis，AVS)患者癥狀重、病死率高，造成患者生活質(zhì)量明顯下降[1]。瓣膜置換(Valve replacement，VR)術(shù)是目前根治此類病人的唯一有效措施，血流動力學(xué)術(shù)后可以得到顯著改善，但心功能的恢復(fù)和遠期預(yù)后并不相同[2]。影響心臟瓣膜病嚴重程度和預(yù)后的主要因素包括：瓣口面積、左心室射血分數(shù)(Left ventricular ejection fraction，LVEF)

2、、跨瓣壓等，臨床觀察發(fā)現(xiàn)這些因素有時與患者的癥狀、術(shù)后心功能的恢復(fù)情況及遠期預(yù)后并無明顯相關(guān)性[3-6]。近期研究顯示：心肌纖維化(Myocardial fibrosis，MF)程度對VR術(shù)后患者的心功能提高和遠期生存率有決定性作用，纖維化程度高的患者術(shù)后9個月內(nèi)心功能改善情況較差，而且10年生存率遠低于纖維化程度低的患者[7]。
　　人C1q/TNF相關(guān)蛋白（C1q/TNF-Related Protein-3，CTRP-3）是一

3、種脂肪因子，可促進脂聯(lián)素以及瘦素的釋放[8,9]。以往相關(guān)文獻證實，CTRP-3又是一種強有力的抗炎因子，其可以抑制脂肪酸、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）以及TLR（Toll-like receptor）介導(dǎo)的炎性通路[10]。CTRP-3還可以獨立地降低血糖，離體實驗表明其可以促進內(nèi)皮細胞的增生以及遷移[11]。
　　我們之前的研究表明CTRP-3能夠防治小鼠缺血心肌細胞的死亡，促進心肌細胞的再生，減少心

4、肌梗死后纖維化的范圍，增加梗死后心肌收縮力[12-15]。但是CTRP-3與心肌纖維化程度有無相關(guān)性尚未見明確報道。
　　目的：通過測定心臟瓣膜病患者與正常人群心肌組織纖維化程度和血漿中脂肪因子C1q/TNF相關(guān)蛋白(C1q/TNF-Related Protein-3，CTRP3)的水平，確定CTRP3與心肌纖維化之間是否存在相關(guān)性，初步探討CTRP3在心肌纖維化過程中的作用及作用機制，分析心臟瓣膜病患者瓣膜置換術(shù)后的預(yù)后情況，為

5、心臟瓣膜病患者的心肌纖維化新的研究方向及可能的治療靶點提供依據(jù)。
　　方法：此項試驗是經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院倫理委員會審核和批準，且獲得患者及其家長知情同意。
　　1.實驗分二組：對照組：2013年6月～2014年6月期間，成人單純房間隔缺損(Atrial septal defect，ASD)或單純室間隔缺損(Ventricular septal defect，VSD)行ASD修補術(shù)或VSD修補術(shù)且無瓣膜病的患者，共12

6、0例。成人主動脈瓣狹窄組：2013年6月～2014年6月期間，成人先天性或風(fēng)濕性心臟病導(dǎo)致的主動脈瓣畸形行主動脈瓣膜置換術(shù)的患者，共120例。
　　2.納入標準：對照組：20～40歲單純先天性心臟病患者，有手術(shù)指征，心功能正常，LVEF>55％，肺動脈壓力<28mmHg。成人主動脈瓣狹窄組：20～40歲符合美國心臟瓣膜疾病治療指南（2011年），有手術(shù)指征患者。
　　3.排除標準：既往有高血壓、高血脂、心肌梗死、冠心病、心臟

7、手術(shù)、糖尿病及惡性腫瘤等病史者排除；嚴重聯(lián)合瓣膜病或同時患有肝腎疾病，多功能臟器衰竭的患者排除；BMI<19者排除，入院時有環(huán)形紅斑、發(fā)熱、皮下結(jié)節(jié)、舞蹈病、關(guān)節(jié)炎及風(fēng)濕活動跡象等臨床表現(xiàn)者排除。
　　4.實驗方法：（1）標本提取：于心臟手術(shù)中分別收集患者的相同位置右心耳組織，心包旁脂肪，瓣膜組織以及手術(shù)當(dāng)日麻醉后患者的血液樣本，血液標本經(jīng)乙二胺四乙酸（Edetate disodium，EDTA）抗凝后離心取血漿，凍存于-70℃；

8、（2）常規(guī)石蠟包埋、切片；（3）心肌Masson染色(按照Masson三色染色試劑盒說明書進行操作)，用IPP-8.0圖像處理軟件處理，計算膠原容積比(Collagen volume fraction，CVF)；（4）酶免疫吸附試驗（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法測定CTRP3濃度（按ELISA試劑盒說明操作）；（5）心肌切片蘇木精-伊紅（Hematoxylin-eosin，HE）染色

9、，光鏡下觀察HE染色標本；（6）通過觀察心肌組織形態(tài)評價纖維化程度；（7）統(tǒng)計學(xué)處理。
　　結(jié)果：1.主動脈瓣狹窄組與對照組相比，年齡、性別、體重、血壓不存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），空腹血糖、膽固醇、甘油三脂、超聲檢查中EF值及FS值均不存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），左室室壁厚度主動脈瓣狹窄組（9.4±3.5mm）比對照組（6.6±3.9mm）明顯增厚（P＜0.01）。
　　2.心肌Masson染色結(jié)果顯示，與對照組相

10、比，主動脈瓣狹窄患者右心耳組織，心包旁脂肪，瓣膜組織細胞外膠原纖維明顯增生，血管管腔明顯變窄，血管壁明顯增厚（P＜0.05）。照相后用圖像分析軟件計算心肌膠原纖維容積比，對照組為（5..66±2.31）%，主動脈瓣狹窄組為（18.92±4.01）%(P＜0.05)。
　　3.心肌切片HE染色顯示，與對照組相比，主動脈瓣狹窄組患者左心室心肌細胞明顯肥大，細胞核明顯增大且細胞胞漿染色明顯欠均勻(P＜0.05)。。
　　4.主動脈

11、瓣狹窄組手術(shù)當(dāng)日麻醉后患者的血液樣本脂肪因子 CTRP-3水平（19.68±6.37）明顯高于對照組（9.13±2.98）（P＜0.01）。
　　5.血液CTRP-3水平與右心耳組織，心包旁脂肪，瓣膜組織膠原容積比成正相關(guān)（P＜0.05）。
　　6.主動脈瓣狹窄組顯示心肌肥厚（P＜0.05）。
　　結(jié)論：本試驗結(jié)果表明，與對照組相比，主動脈瓣狹窄患者心肌細胞明顯肥大，心肌間質(zhì)纖維化程度明顯升高，且血漿和心肌細胞CTRP