YSD降血糖有效組分篩選及其制劑學(xué)研究.pdf

1、YSD為一傳統(tǒng)中藥，用于治療消渴(糖尿病)有較為悠久的歷史，古方醫(yī)典多有記述，但現(xiàn)代采用YSD治療糖尿病的臨床應(yīng)用卻日漸稀少，研究報道也極為罕見。究其原因，一是YSD古方應(yīng)用基本上是入丸散，而現(xiàn)代臨床應(yīng)用與制劑大多入湯劑或水煎煮提取，由于有效物質(zhì)基礎(chǔ)不明，所取用的可能根本是無效成分，難以保證其臨床有效性；二是 YSD不管入丸散還是入湯劑或水煎煮提取制成制劑，均難以避免所含大量鞣質(zhì)的攝入，鞣酸進(jìn)入體內(nèi)后被分解為倍酸與焦倍酸，長期服用可引起

2、灶性肝細(xì)胞壞死，此一毒副反應(yīng)嚴(yán)重限制了YSD的臨床應(yīng)用。尋找YSD降糖有效組分并提取純化富集，制成合適的制劑，保證有效組分的利用并避免有毒成分對人體的傷害，對于傳統(tǒng)中藥YSD的研究與利用具有重要意義。 該課題采用藥理篩選獲得YSD降血糖治療糖尿病的有效部位YSD油，以物理化學(xué)方法探明了該有效部位的化學(xué)構(gòu)成與理化性質(zhì)，采用溶劑提取法提取純化獲得有效部位含量大于95％的原料YSD油，經(jīng)制劑學(xué)研究制成軟膠囊劑，制劑質(zhì)量穩(wěn)定，藥效毒理及

3、臨床研究證明安全有效。該課題共分為四部分：YSD降血糖有效組分篩選；YSD降血糖有效部位YSD油的化學(xué)及理化性質(zhì)研究；YSD降血糖有效部位YSD油的提取純化工藝研究；YSD降糖有效部位YSD油的制劑學(xué)與制劑質(zhì)量控制研究。 藥理篩選先將YSD藥材以不同極性溶劑系統(tǒng)提取分離成不同組分，以四氧嘧啶所致家兔高血糖作為模型，比較不同組分的降糖活性，結(jié)果證明YSD石油醚提取物有明顯的降糖活性，其有效部位為其中脂肪油類成分(即YSD油)，再以

4、不同極性溶劑平行提取制成各提取物，以四氧嘧啶所致家兔高血糖作為模型，進(jìn)一步確證YSD油為其降血糖有效部位；針對YSD的兩種商品藥材DB與JB，采用鏈脲佐菌素所致的糖尿病小鼠作為模型，對其降糖活性進(jìn)行比較，結(jié)果證明兩者降糖作用并無明顯差異(P>0.05)，均可同等入藥；采用化學(xué)處理與柱層析將YSD油進(jìn)一步分離純化，獲得的組分以鏈脲佐菌素所致小鼠糖尿病模型進(jìn)行篩選，結(jié)果證明進(jìn)一步的化學(xué)與柱色譜分離均導(dǎo)致降糖活性降低，YSD油中各組分協(xié)同作用

5、達(dá)到降糖目的。以上有關(guān)YSD降糖作用的藥理研究及有效組分篩選，國內(nèi)外文獻(xiàn)均未見有報道。 化學(xué)研究結(jié)果表明，YSD油中主要成分為簡單甘油脂，約占45％左右，其次為游離脂肪酸，約占30％左右，再次為復(fù)合脂質(zhì)糖酯，約占20％左右，不含磷脂，含不皂化物約3％，由β-谷甾醇等組成。酯解后脂肪酸總量約75％，經(jīng)GC-MS探明其脂肪酸組成為：癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸，并以月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸含量較高，與

6、其它植物油相比有明顯的不同；YSD油的理化性質(zhì)研究探明了其溶解性、相對密度、折光率、酸值、皂化值、碘值、過氧化值、石油醚不溶物、水分與揮發(fā)物、溶劑殘留等與制劑有關(guān)的理化性質(zhì)；采用氣相色譜法研究并建立了YSD油中月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸3種主要脂肪酸的定量分析方法，為YSD油及其制劑的工藝研究與質(zhì)量控制提供評價指標(biāo)與評價方法。以上YSD油的化學(xué)構(gòu)成、理化性質(zhì)研究及分析方法建立均為本課題首次提出。 YSD降糖有效部位YSD油的提取純

7、化研究采用藥理指標(biāo)與化學(xué)指標(biāo)相結(jié)合的方法，對制備工藝與工藝參數(shù)進(jìn)行了考察。YSD油提取方法選擇溶劑提取法與CO<,2>超臨界流體萃取法兩種方法，以鏈脲佐菌素所致小鼠糖尿病模型對兩種提取方法所得YSD油的降糖活性進(jìn)行比較，結(jié)果證明兩者降糖活性無明顯差異，綜合考慮生產(chǎn)成本，提取率等因素，選擇溶劑提取法；提取溶劑比較石油醚與6<'[＃]>抽提溶劑油，兩者提取所得YSD油化學(xué)組成與理化性質(zhì)相近，降糖作用差異不大，考慮成本因素選擇6<'[＃]>抽

8、提溶劑油，溶劑提取方法選擇熱回流法；工藝條件篩選采用正交試驗(yàn)法對提取條件進(jìn)行考察，確定了最佳的提取條件。純化工藝采用檸檬酸脫過氧化物并螯合金屬離子，可使過氧化值由1.5降至0.15左右，并除去油中的金屬離子以保證YSD油的穩(wěn)定性，試驗(yàn)中對檸檬酸用量進(jìn)行了篩選；采用真空加熱脫水脫嗅2小時使水分降至3％以下，殘留溶媒降至2.5mg／kg左右；抗氧化劑經(jīng)比較，選擇BHT，可達(dá)到抗氧化效果；考慮到對YSD油藥理活性的影響，未再進(jìn)行進(jìn)一步的純化。

9、中試研究證明工藝穩(wěn)定可行，YSD油轉(zhuǎn)移率達(dá)90％左右，提取物中脂肪油含量95％以上，月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸三種主要脂肪酸含量在50％左右。以上YSD油的提取與純化工藝均未見國內(nèi)外文獻(xiàn)報道。 針對該工藝所得YSD油，依據(jù)其化學(xué)與理化性質(zhì)研究結(jié)果，建立了相關(guān)的質(zhì)量評價指標(biāo)與質(zhì)量評價方法，以所建立的標(biāo)準(zhǔn)采用加速試驗(yàn)法考察中試產(chǎn)品的穩(wěn)定性，結(jié)果證明在3個月的加速試驗(yàn)中YSD油質(zhì)量穩(wěn)定。YSD的有效性經(jīng)藥效學(xué)研究證明，YSD油口服對Al

10、loxan糖尿病模型家兔、Streptozocin糖尿病模型大鼠和腎上腺素糖尿病模型大鼠給藥一次和連續(xù)給藥4周，均有明顯的降血糖作用；對正常家兔和小鼠血糖有明顯的降血糖作用；能顯著提高正常小鼠和Alloxan糖尿病小鼠對淀粉負(fù)荷的糖耐量作用，亦能顯著提高正常家兔和Alloxan糖尿病家兔對葡萄糖負(fù)荷的糖耐量作用：能顯著增加Streptozotocin糖尿病小鼠血清胰島素含量，并能明顯降低胰高血糖素含量影響；能明顯減輕氫化可松誘發(fā)家兔胰島

11、素抗性的產(chǎn)生：能極顯著降低A11oxan糖尿病家兔和大鼠血清膽固醇含量，但對Alloxan糖尿病家兔和大鼠血清甘油三酯無明顯影響。YSD油降糖溫和、平穩(wěn)，在200～50mg／kg范圍內(nèi)，其上述作用呈明顯的量效關(guān)系。YSD的安全性經(jīng)動物急性毒性試驗(yàn)、一般藥理學(xué)研究、大鼠和Beagle犬長期毒性試驗(yàn)研究，均證明YSD油安全范圍大，較大劑量長期服用，對動物無明顯的病理性損害作用，亦無延遲性毒性反應(yīng)。 YSD油的制劑研究綜合考慮YSD油

12、理化性質(zhì)與糖尿病用藥特點(diǎn)，給藥途徑選擇口服給藥；劑型選擇制成滴丸、口服乳劑、軟膠囊與硬膠囊(固體分散體)4種劑型，以藥物完整劑型給藥，并以對四氧嘧啶所致高血糖家兔血糖水平的影響作為評價指標(biāo)，綜合比較4種劑型的起效時間與活性強(qiáng)弱，最終選擇制成軟膠囊劑；以制劑質(zhì)量穩(wěn)定為依據(jù)對囊殼配方與成型工藝條件進(jìn)行了考察；中試試驗(yàn)研究證明工藝穩(wěn)定可行；質(zhì)量研究建立了3個專屬性較強(qiáng)的鑒別方法，對影響制劑質(zhì)量與穩(wěn)定性的過氧化值、崩解時限、裝量差異、砷鹽、重金

13、屬、微生物限度指標(biāo)進(jìn)行考察并制訂了相應(yīng)的限度，以氣相色譜法，測定了YSD油中三個主要脂肪酸月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸的含量，制訂了相應(yīng)的含量限度；該工藝所制得的YSD油軟膠囊經(jīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)證明，在2年內(nèi)各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；其有效性經(jīng)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期臨床研究證明，用于治療II型糖尿病，臨床應(yīng)用安全有效。 綜上所述，該課題經(jīng)藥理篩選與化學(xué)研究，首次闡明了YSD治療消渴(糖尿病)的物質(zhì)基礎(chǔ)，采用現(xiàn)代工藝提取純化有效部位使之與有害水溶性雜