靈芝有效降糖組分的篩選及降血糖機(jī)理研究.pdf

1、[目的]：傳統(tǒng)中醫(yī)即以靈芝為重要配伍組份用于內(nèi)分泌、代謝紊亂相關(guān)疾病的治療。本文以蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)為靶點(diǎn)從靈芝子實(shí)體中篩選具有有效降血糖效果的PTP1B抑制劑，并對(duì)該抑制劑進(jìn)行理化性質(zhì)及降血糖機(jī)理的研究。
　　[方法]：利用醇提、水提和堿提等手段結(jié)合醇沉、凝膠柱層析等技術(shù)從靈芝子實(shí)體中篩選有效降血糖組分;利用高效液相色譜，紅外光譜，核磁共振光譜對(duì)提取物進(jìn)行純度和組成表征;利用分析單糖組成、氨基酸組成、多糖含量、蛋

2、白含量等，建立這些參數(shù)與對(duì)PTP1B抑制能力的相關(guān)性，并研究對(duì)PTP1B抑制的動(dòng)力學(xué);利用鏈脲霉素(STZ)誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠及大鼠，db/db基因型2型糖尿病小鼠對(duì)有效降糖提取物進(jìn)行藥效學(xué)研究，并與現(xiàn)用臨床一線西藥二甲雙胍及羅格列酮相對(duì)照;同時(shí)進(jìn)行了有效提取物的初步急性安全性試驗(yàn);利用westernblotting技術(shù)，免疫沉淀技術(shù)分析STZ致糖尿病大鼠及基因糖尿病小鼠給藥前后肝和骨骼肌組織中PTP1B表達(dá)水平和活性的變化及胰島素受體

3、β亞基（IRβ）磷酸化水平的變化，從而分析有效降糖提取物在體內(nèi)的降血糖機(jī)理;另外，用酶標(biāo)儀、熒光光譜等研究提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、自由基等抑制能力和動(dòng)力學(xué);此外，用試劑盒分析與糖尿病有關(guān)的代謝性疾病的體內(nèi)血液生化指標(biāo)。
　　[結(jié)果]：從靈芝中篩選出7種對(duì)PTP1B有抑制效果的組分，其中抑制最有效的組分IC50=5.12±0.05μg/mL，將該組分命名為FYGL;對(duì)FYGL組成分析表明，F(xiàn)YGL為分子量2.6×105的

4、蛋白多糖，其中蛋白與多糖含量比為17∶77。多糖部分主要由葡聚糖組成，蛋白部分含有19種常見(jiàn)氨基酸;對(duì)PTP1B抑制動(dòng)力學(xué)分析表明，F(xiàn)YGL對(duì)PTP1B的抑制呈競(jìng)爭(zhēng)性抑制，即與PTP1B的底物競(jìng)爭(zhēng)相同的活性位點(diǎn)。動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)證明，F(xiàn)YGL能顯著降低STZ致2型糖尿病模型小鼠及大鼠的血糖，并呈劑量和時(shí)間依賴性，且與二甲雙胍及羅格列酮相當(dāng);同樣，db/db基因型糖尿病小鼠藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，F(xiàn)YGL亦顯著降低小鼠血糖，且與臨床一線西藥相當(dāng);初

5、步急性安全性試驗(yàn)表明，小鼠半致死量LD50=6g/kg，安全性很高;藥理學(xué)試驗(yàn)證明，對(duì)于STZ致糖尿病大鼠，F(xiàn)YGL能降低骨骼肌PTP1B的表達(dá)水平和活性，進(jìn)而調(diào)控IRβ亞基的磷酸化水平;對(duì)于db/db基因型糖尿病小鼠，F(xiàn)YGL能顯著降低肝臟和骨骼肌PTP1B的表達(dá)水平，降低骨骼肌PTP1B的活性，增加肝臟和骨骼肌IRβ亞基的磷酸化水平。此外，STZ致糖尿病大鼠試驗(yàn)表明，F(xiàn)YGL不僅能顯著降低血糖，而且能增加血清胰島素濃度，降低胰島素抵

6、抗指數(shù)，增加胰島素分泌指數(shù)，提示FYGL可能有修復(fù)胰島細(xì)胞的功能;FYGL亦能降低db/db小鼠胰島素抵抗指數(shù)，但不能促進(jìn)胰島素的分泌。另外，F(xiàn)YGL對(duì)α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、自由基等亦有抑制能力，對(duì)α-葡萄糖苷酶亦呈競(jìng)爭(zhēng)性抑制機(jī)理，提示FYGL可能具有多靶點(diǎn)降糖作用功能。同時(shí)，F(xiàn)YGL能有效改善STZ致2型糖尿病大鼠及db/db小鼠中與代謝紊亂綜合癥相關(guān)的血脂生化指標(biāo)，如自由脂肪酸(FFA)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)，低

7、密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。
　　[結(jié)論]：FYGL有顯著降低血糖能力，與臨床一線西藥二甲雙胍及羅格列酮相當(dāng)，且安全性高，其降血糖機(jī)理是通過(guò)降低體內(nèi)肝臟和骨骼肌PTP1B表達(dá)水平，降低骨骼肌PTP1B活性，進(jìn)而調(diào)控胰島素受體β亞基的磷酸化水平，同時(shí)降低胰島素抵抗指數(shù)。另外，F(xiàn)YGL可能具有多靶點(diǎn)降糖作用功能，同時(shí)改善與糖尿病代謝紊亂綜合癥相關(guān)的血脂生化指標(biāo)。FYGL是一種新型胰島素增敏劑，有望