肝癌的發(fā)生與胰島素抵抗的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　 探討肝癌患者的胰島素抵抗現(xiàn)象及胰島素抵抗程度，論證胰島素抵抗與肝癌形成機(jī)制，提出防治途徑;以動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)構(gòu)建裸鼠肝炎、肝纖維化、肝硬化模型，在此基礎(chǔ)上建立了肝癌動(dòng)物模型;探討肝炎，肝纖維化，肝硬化背景下胰島素抵抗并與肝癌發(fā)生的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.收集天津腫瘤醫(yī)院2008年6月～2009年6月空腹血糖在正常范圍的肝癌患者48例，肝硬化肝癌患者56例，肝硬化患者34例，正常對(duì)照組30例。RIA

2、法檢測(cè)血清胰島素和C肽，酶聯(lián)免疫吸附的方法(ELISA)檢測(cè)血清抵抗素評(píng)定胰島素抵抗指數(shù)。
　　 2.經(jīng)典四氯化碳構(gòu)建裸鼠肝炎、肝纖維化、肝硬化模型，設(shè)立空白對(duì)照。裸鼠隨機(jī)分成兩組一實(shí)驗(yàn)組為腹腔注射CCL4橄欖油混合15只、對(duì)照組為腹腔注射橄欖油15只，將混合組和單純橄欖油組再各分三組，即2周肝炎組、7周肝纖維化組、12周肝硬化組。實(shí)驗(yàn)組每組裸鼠5只，對(duì)照組每組裸鼠5只。動(dòng)態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中小鼠精神生長(zhǎng)狀態(tài)，常規(guī)病理學(xué)檢測(cè)肝炎、肝

3、纖維、肝硬化組織病理表現(xiàn)。
　　 3.在建立了肝炎，肝纖維化，肝硬化模型的基礎(chǔ)上，不同背景動(dòng)物接種高/低轉(zhuǎn)移肝癌，觀察不同程度胰島素抵抗情況下肝癌生長(zhǎng)情況。采用ELISA法檢測(cè)胰島素、RIA法檢測(cè)resistin水平，評(píng)價(jià)胰島素抵抗程度;行HE染色，動(dòng)態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中小鼠肝臟病理學(xué)改變;免疫組化法檢測(cè)肝炎肝硬化組織中resistin的表達(dá)情況;realtime-PCR及western blot法證實(shí)肝臟胰島素抵抗存在。綜合評(píng)價(jià)肝

4、炎肝硬化過(guò)程中胰島素抵抗的發(fā)生情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組患者血常規(guī)、血糖、腎功能、血?dú)夥治觥㈦娊赓|(zhì)、心電圖、腹部超聲，結(jié)果大致正常，且各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。肝癌組、肝硬化組、肝硬化肝癌ALT、AST、GGT明顯高于對(duì)照組，AFP陽(yáng)性例數(shù)肝癌組和肝硬化肝癌組無(wú)差異，明顯高于肝硬化組和對(duì)照組。澳抗+（丙）例數(shù)在肝癌組、肝硬化組、肝癌肝硬化組無(wú)差異。肝癌組較對(duì)照組的空腹胰島素和血清C肽水平高。肝硬化組、肝癌肝

5、硬化組的空腹胰島素和血清C肽水平顯著高于對(duì)照組、肝癌組(P＜0.05)，且肝硬化組的空腹胰島素和血清C肽水平高于肝癌肝硬化組。應(yīng)用HOMA模型計(jì)算各組間的胰島素抵抗指數(shù)結(jié)果同胰島素和血清C肽水平相近通過(guò)檢測(cè)血清抵抗素的濃度，正常對(duì)照組較肝癌組，肝硬化組，肝癌肝硬化組低，肝癌組低于肝癌肝硬化組，肝癌肝硬化組低于單純肝硬化組，抵抗素的濃度與肝硬化程度呈正相關(guān)，和胰島素分泌正相關(guān)。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組大鼠皮膚光澤差，鄒褶多，食欲差，精神

6、萎靡活動(dòng)少，對(duì)外界刺激反應(yīng)慢。對(duì)照組裸鼠體重逐漸正常增加，實(shí)驗(yàn)組裸鼠體重前期增加緩慢，后期增加如常，2周實(shí)驗(yàn)組體重增加3.6±1.8g，對(duì)照組體重增加6.4±0.7g(P＜0.05)，7周實(shí)驗(yàn)組體重增加11.5±0.8g，對(duì)照組體重增加12.7±1.4g(P＞0.05)，12周體重增加13.2±1.2g，對(duì)照組體重增加15.4±2.1g(P＞0.05)。肝功能指標(biāo)變化:ALT(IU/L)2周實(shí)驗(yàn)組86.5±23.6、對(duì)照組30.4±4.

7、7，AST(IU/L)2周實(shí)驗(yàn)組92.8±37.4、對(duì)照組27.7±8.5，GGT(IU/L)2周實(shí)驗(yàn)組168.4±39.5對(duì)照組37.9±7.1。ALT(IU/L)7周實(shí)驗(yàn)組65.3±9.6、對(duì)照組28.5±5.9，AST(IU/L)7周實(shí)驗(yàn)組59.8±8.1、對(duì)照組29.4±7.2，GGT(IU/L)7周實(shí)驗(yàn)組98.7±8.4對(duì)照組35.3±6.2。ALT(IU/L)12周實(shí)驗(yàn)組48.7±6.6、對(duì)照組19.8±5.3，AST(IU

8、/L)12周實(shí)驗(yàn)組45.4±7.2、對(duì)照組22.6±5.8， GGT(IU/L)12周實(shí)驗(yàn)組71.6±10.3對(duì)照組42.7±6.8。
　　 3.腹腔注射不同周期四氯化碳后種植不同潛能肝癌細(xì)胞，其體積均大于同周期對(duì)照組，尤以7周肝纖維化、12周肝硬化背景下腫瘤體積明顯大于橄欖油對(duì)照組(P＜0.05)。ELISA法檢測(cè)2，7，12周實(shí)驗(yàn)組胰島素均比對(duì)照組增高，P＜0.001。RIA法檢測(cè)resistin2，7，12周實(shí)驗(yàn)組均比對(duì)照

9、組增高，P=0.000。胰島素抵抗指數(shù):2周，7周，12周實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，P＜0.001。不同背景下胰島素、抵抗素、胰島素抵抗指數(shù)均高于對(duì)照組，且隨肝纖維化程度加重，胰島素、抵抗素、胰島素抵抗指數(shù)逐漸升高;免疫組化法證實(shí)Resistin在2周實(shí)驗(yàn)組中陽(yáng)性比例為20％(6/30)，同期橄欖油組陽(yáng)性例數(shù)為16.7％(5/30)，兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞0.05。在7周實(shí)驗(yàn)組比例為55.6％(15/27)，同期橄欖油組陽(yáng)性例數(shù)為23.3％(7

10、/30)，P=0.013;在12周實(shí)驗(yàn)組比例為75％(21/28)，同期對(duì)照組中表達(dá)13.3％(4/30)，P＜0.001; real time-PCR與westernblot法檢測(cè)不同周期肝臟組織IRS-2mRNA水平，在正常肝組織中高表達(dá)，在肝炎、肝纖維化、肝硬化組織中表達(dá)水平逐漸下降。隨著腫瘤的形成，肝癌中表達(dá)水平再次升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.肝臟是胰島素抵抗的重要靶器官，肝臟的炎性改變均可導(dǎo)致全身性胰島素抵

11、抗，肝癌、肝硬化患者還是肝癌肝硬化患者均存在胰島素抵抗，胰島素抵抗是肝癌形成的原因之一，胰島素抵抗與肝硬化密切相關(guān)且與肝硬化分級(jí)相關(guān)，而肝硬化進(jìn)一步促進(jìn)肝癌的形成。
　　 2.利用四氯化碳橄欖油混合溶液注射裸鼠腹腔，能夠成功建立建立肝炎、肝纖維化、肝硬化模型。為將來(lái)在肝臟不同背景下種植人的肝癌細(xì)胞打下了基礎(chǔ)。
　　 3.利用裸鼠先建立肝炎、肝纖維化、肝硬化模型背景上的肝癌動(dòng)物模型;不同肝臟背景下腫瘤增長(zhǎng)速度較正常肝組織迅