蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析大鼠星形細(xì)胞和C-,6-細(xì)胞的蛋白差異.pdf

1、背景及目的：已有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞移植至有移植膠質(zhì)瘤生長的鼠腦內(nèi)，神經(jīng)干細(xì)胞很快充滿腫瘤，并沿著浸潤的腫瘤細(xì)胞分布，即使將神經(jīng)干細(xì)胞接種在腫瘤的遠(yuǎn)隔部位，甚至把神經(jīng)干細(xì)胞接種在對側(cè)的大腦半球和側(cè)腦室，它們也能穿過正常腦組織移行入膠質(zhì)瘤；甚至注射入靜脈系統(tǒng)的神經(jīng)干細(xì)胞都不同程度的聚集在膠質(zhì)瘤內(nèi)，而非注射局部。這說明膠質(zhì)瘤細(xì)胞中存在著誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移和分化的信號物質(zhì)，在體內(nèi)可以誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤遷移。而且體外實(shí)驗(yàn)證明C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞無血

2、清培養(yǎng)的上清中也存在著能夠誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的物質(zhì)。同時(shí)研究也表明星形膠質(zhì)細(xì)胞對神經(jīng)干細(xì)胞無遷移作用。本研究則是利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞之間的蛋白表達(dá)差異，找出膠質(zhì)瘤細(xì)胞中存在促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移的物質(zhì)基礎(chǔ)，并為進(jìn)一步分離、純化該物質(zhì)做準(zhǔn)備。 方法：從新生3.5天的SD大鼠大腦皮層中培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，同時(shí)培養(yǎng)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞。分別提取細(xì)胞總蛋白，進(jìn)行第一向等電聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺

3、凝膠電泳(SDS-PAGE)技術(shù)分離總蛋白，Bio-SafelMCommassie染色，GS-800密度掃描儀獲取圖像，并測量凝膠蛋白斑點(diǎn)的在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差。利用PDQuest軟件對凝膠圖像進(jìn)行分析，以識別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。 結(jié)果：通過軟件分析發(fā)現(xiàn)，星形膠質(zhì)細(xì)胞組和C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞組三塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為523.12±16.32和549.62±19.61，平均匹配點(diǎn)數(shù)分別為452.37±17.78

4、和471.69±20.76，匹配率達(dá)86.46％和85.82％。不同凝膠間蛋白質(zhì)點(diǎn)在IEF方向的偏差為(0.67±0.48)rIllTl，在SDS-PAGE方向上的偏差為(0.73±0.56)mm。星形膠質(zhì)細(xì)胞和C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)點(diǎn)通過分析比較，發(fā)現(xiàn)有24個(gè)點(diǎn)發(fā)生了明顯和穩(wěn)定的質(zhì)和量的改變，其中2個(gè)點(diǎn)在星形膠質(zhì)細(xì)胞中沒有發(fā)現(xiàn)表達(dá)，14個(gè)點(diǎn)在C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)，8個(gè)點(diǎn)明顯下調(diào)。 結(jié)論：星形膠質(zhì)細(xì)胞和C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的雙