線粒體基因組COⅢ基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：1.研究浙江地區(qū)漢族人線粒體DNA中COⅢ基因和劍橋標(biāo)準(zhǔn)序列之間的差異,查找COⅢ基因區(qū)域變異的位點(diǎn).2.探討變異位點(diǎn)是浙江漢族人的多態(tài)性位點(diǎn)還是引起2型糖尿病的突變位點(diǎn).3.探討線粒體DNACOⅢ基因變異與2型糖尿病主要臨床指標(biāo)及并發(fā)癥的相關(guān)性. 方法：1.隨機(jī)收集浙江地區(qū)漢族人群中無血緣關(guān)系的185例被確診為2型糖尿病患者,詳細(xì)記錄每例患者的臨床資料及主要生化指標(biāo).同時選取145例無糖尿病家族史和口服葡萄糖耐量正常者

2、的血液標(biāo)本作為對照.2.提取全血基因組DNA,用特定的針對整個COⅢ基因區(qū)域的兩對引物擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物并純化.3.對PCR純化產(chǎn)物直接測序分析.4.使用生物信息學(xué)軟件(DNAstar和Chromas)進(jìn)行比對分析,查找變異位點(diǎn). 結(jié)果： 1.浙江地區(qū)漢族人中COⅢ基因存在大量的變異位點(diǎn).185例糖尿病患者組中112例有COⅢ基因變異,共計34個變異位點(diǎn),145例正常對照組中101例有COⅢ基因變異,共計33個變異位點(diǎn)

3、,對這兩組的變異位點(diǎn)作統(tǒng)計學(xué)分析,它們在兩組間分布都無統(tǒng)計學(xué)意義,推測它們可能是多態(tài)性改變. 2.糖尿病組中有34個變異位點(diǎn)(28個為同義突變和6個為錯義突變);其中13個同義突變和5個錯義突變在www.mitimap.org中均未見報道.對這6個錯義突變在不同物種間進(jìn)行保守性分析,它們都不是進(jìn)化上的保守位點(diǎn),推測為多態(tài)性現(xiàn)象. 3.把112例有變異點(diǎn)的糖尿病患者分為有家族史和無家族史,并作統(tǒng)計學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)G9801

4、A在兩組間分布有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且只在有家族史患者中出現(xiàn).有家族史組與無家族史組比較:有家族史組女性患病率顯著升高、平均發(fā)病年齡顯著提前、病程顯著延長、平均體重指數(shù)顯著降低(P<0.05);其余生化指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 4.糖尿病患者并發(fā)有腎病組和無腎病組作統(tǒng)計學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)C9449T、A9632G和T9856C三個變異位點(diǎn)只存在于有腎病組中,且在兩組間的分布具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).有腎病組與

5、無腎病組比較:有腎病組平均發(fā)病年齡顯著降低、病程顯著延長、糖化血紅蛋白顯著升高(P<0.05). 5.C9827T只存在于有視網(wǎng)膜病變組,且在兩組間分布有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).有視網(wǎng)膜病變組與無視網(wǎng)膜病變組相比:有視網(wǎng)膜病變組發(fā)病年齡、體重指數(shù)顯著降低,病程顯著延長(P<0.05). 6.有周圍神經(jīng)病變組中A9377G、G9575A與179540C,T9824C與T9540C,A9545G與T9540C同時出現(xiàn)變異

6、.G9300A只存在于有周圍神經(jīng)病變組,且在兩組間分布有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).有周圍神經(jīng)病變組中平均病程、餐后2小時血糖顯著高于無周圍神經(jīng)病變組(P<0.05). 7.有高血壓組的平均年齡、平均發(fā)病年齡、TC、LDL、BMI明顯高于無高血壓組(P<0.05). 結(jié)論： 1.線粒體DNACOⅢ基因區(qū)域存在大量變異位點(diǎn),推測多為多態(tài)性現(xiàn)象. 2.C9827T,C9449T,A9632G,T9856c,G

7、9801A和G9300A等變異位點(diǎn)可能與浙江漢族人群糖尿病患者的臨床表現(xiàn)及并發(fā)癥有密切聯(lián)系,其中C9827T、T9856C、G9801A和G9300A未曾見報道,需要增大樣本量和增加樣本類型來進(jìn)一步證實(shí). 3.線粒體DNACOⅢ基因糖尿病的臨床癥狀復(fù)雜,攜帶有不同變異患者的臨床表現(xiàn)各不相同,即使攜帶有同一變異因個體不同而臨床表現(xiàn)差異很大. 4.對于浙江地區(qū)漢族人群中2型糖尿病患者,我們除了傳統(tǒng)的臨床癥狀及生化指標(biāo)檢查外,