白介素-6基因多態(tài)性，慢性牙周炎和2型糖尿病之間相關(guān)性研究.pdf

1、研究目的： 本研究的目的是評(píng)估一個(gè)中國(guó)人群中IL-6基因多態(tài)性，2型糖尿病和牙周炎三者之間的關(guān)系，并作2型糖尿病和（或）牙周炎患者的牙周健康狀況及相關(guān)危險(xiǎn)因素分析。 研究方法： 所有受試者來(lái)自南方醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院（廣東省口腔醫(yī)院）、南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院和廣州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院在2007年8月至2008年9月期間的門診病人或住院病人，以及在2008年8月由南方醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院（廣東省口腔醫(yī)院）主持的一次

2、口腔健康調(diào)查中的志愿者。 每位受試者均符合以下條件：40歲及以上年齡、至少有14顆可評(píng)估的牙（其中有4顆磨牙）、中國(guó)漢族和沒有親緣關(guān)系的個(gè)體。受試者的排除標(biāo)準(zhǔn)是：①除了2型糖尿病外已知的其它系統(tǒng)性疾?。ㄈ绻谛牟　⒏窝?、腎炎、血液性疾病等）；②3個(gè)月內(nèi)服用過(guò)抗生素；⑨1年內(nèi)接受過(guò)牙周治療；④懷孕的女性；⑤哺乳期的女性。 所有受試者被分成4組：?jiǎn)渭兟匝乐苎捉M（CP）、單純2型糖尿病組（T2DM）、慢性牙周炎伴2型糖尿病組（

3、CP&T2DM）以及健康對(duì)照組。所有2型糖尿病患者由糖尿病專科醫(yī)生診斷，他們的診斷標(biāo)準(zhǔn)與1999年世界衛(wèi)生組織推薦的標(biāo)準(zhǔn)一致。這些2型糖尿病患者都在醫(yī)院里接受糖尿病治療，他們被隨后的牙周檢查分成單純2型糖尿病組或慢性牙周炎伴2型糖尿病組。慢性牙周炎患者的診斷采用1999年牙周病分類國(guó)際研討會(huì)及第5屆歐洲牙周病學(xué)研討會(huì)決議報(bào)告所推薦的臨床標(biāo)準(zhǔn)。簡(jiǎn)言之，中重度牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)是臨床附著喪失（CAL）在30%以上的位點(diǎn)（含30%）大于或等于3

4、mm。健康對(duì)照和無(wú)慢性牙周炎的2型糖尿病患者則要求沒有牙齦炎、牙周炎的臨床表現(xiàn)，包括沒有臨床附著喪失和探診出血（BOP）位點(diǎn)，以及探診牙周袋深度（PD）大于3mm的位點(diǎn)。 每位受試者應(yīng)完成3個(gè)步驟。第一步，填寫一份問(wèn)卷調(diào)查，內(nèi)容包括性別、年齡、種族、吸煙狀況、身高、體重、系統(tǒng)性疾病史、牙周疾病史和壓力；第二步，取頰粘膜脫離細(xì)胞棉拭子，在10%的受試者中取了第二支棉拭子，單獨(dú)編號(hào)，以用來(lái)實(shí)驗(yàn)質(zhì)量檢測(cè)：最后，由一名調(diào)查人員對(duì)每位受試

5、者作牙周檢查，另一名調(diào)查人員作記錄，檢查6個(gè)指數(shù)牙以及每個(gè)指數(shù)牙的六個(gè)位點(diǎn)的臨床參數(shù)來(lái)評(píng)估受試者牙周狀況，內(nèi)容包括牙周袋探診深度（PD）、臨床附著喪失（CAL）及探診出血（BOP），使用Williams探針。另外，除了第三磨牙外所有缺失牙被記錄。 采用CHELEX-100法抽提基因組DNA，分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度。采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）法測(cè)定IL-6啟動(dòng)子區(qū)-174、-572、-597單核苷

6、酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型，引物按參考文獻(xiàn)設(shè)計(jì)。 本研究中，為了驗(yàn)證多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）法的正確性，采用兩種方法，從不同角度加以驗(yàn)證。第一，在大約10%的受試者中，取了第二支棉拭子，這些棉拭子被單獨(dú)編號(hào)，用同樣的方法來(lái)測(cè)定IL-6-174、-572、-597單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型，以評(píng)估多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）法的結(jié)果是否可重復(fù)。第二，我們?cè)诘谝恢奘米拥腜CR產(chǎn)物中

7、，每個(gè)位點(diǎn)每個(gè)基因型隨機(jī)抽取2個(gè)或以上的樣本，去直接測(cè)序，以驗(yàn)證多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）法是否正確。 每個(gè)位點(diǎn)中通過(guò)卡方檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)基因型的哈-溫平衡（Hardy-Weinberg equilibrium），IL-6啟動(dòng)子區(qū)-174、-572、-597單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的單倍型使用一個(gè)專業(yè)軟件（SHEsis software）來(lái)構(gòu)建。單向方差分析被用來(lái)計(jì)算連續(xù)變量（包括年齡、體重指數(shù)、失牙數(shù)、牙周袋探

8、診深度、臨床附著喪失、探診出血）的均數(shù)，其中年齡、體重指數(shù)、失牙數(shù)、牙周袋探診深度的P值使用單向方差分析來(lái)計(jì)算，臨床附著喪失、探診出血（只有兩組）的P值則通過(guò)t檢驗(yàn)來(lái)計(jì)算。t檢驗(yàn)還被用來(lái)檢驗(yàn)每組內(nèi)IL-6-572不同基因型對(duì)應(yīng)的缺牙數(shù)之間的差異，而4組間缺牙數(shù)的比較通過(guò)單向方差分析計(jì)算?？ǚ綑z驗(yàn)用來(lái)檢驗(yàn)分類變量（包括性別、吸煙、壓力、等位基因頻率、基因型分布）的差異的顯著性，其中等位基因頻率和基因型分布的兩組間的多重比較也通過(guò)卡方檢驗(yàn)來(lái)

9、完成。如果基因型分布的兩組間的多重比較發(fā)現(xiàn)差異有顯著性，則通過(guò)調(diào)整了年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙、壓力等危險(xiǎn)因素的二分類logistic回歸分析進(jìn)一步分析。P值小于0.05被認(rèn)為差異有顯著性，為了控制假陽(yáng)性結(jié)果，多重比較的結(jié)果則使用一個(gè)經(jīng)Bonferroni校正的P值來(lái)評(píng)估，即P值小于0.008（0.05/6）被認(rèn)為差異有顯著性。本研究所有統(tǒng)計(jì)、圖都通過(guò)SPSS13.0來(lái)完成。 研究結(jié)果： 159位單純牙周炎患者（40-8

10、5歲）、88位單純2型糖尿病患者（40-85歲）及110位慢性牙周炎伴2型糖尿病患者（40-87歲）被選擇，135位健康個(gè)體（40-82歲）構(gòu)成對(duì)照組。 IL-6-174和-572的基因型都符合哈-溫平衡，IL-6-174位點(diǎn)表現(xiàn)出很低的等位基因頻率，在481名受試者中（有11位受試者的IL-6-174的基因型沒測(cè)出）僅發(fā)現(xiàn)兩個(gè)GC雜合子，分別在慢性牙周炎伴2型糖尿病組和慢性牙周炎組。而IL-6-597沒發(fā)現(xiàn)一個(gè)含A的變異基因

11、型。因?yàn)檫@兩個(gè)位點(diǎn)的等位基因頻率太低，所以我們放棄對(duì)他們的進(jìn)一步分析。 4種可能的單倍型只發(fā)現(xiàn)3種有效（GGG，GCG和CGG），它們的頻率分布分別是：GGG18.8%，GCG81.0%和CGG0.2%。可見，兩種主要的單倍型（GGG和GCG）占了3種單倍型的9996以上。因?yàn)镚CG只相當(dāng)于-572 C-allele，GGG只相當(dāng)于-572 G-allele，所以我們放棄IL-6啟動(dòng)子區(qū)單倍型的進(jìn)一步討論分析， 有關(guān)IL

12、-6-572位點(diǎn)的基因型4組間分布，我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)趨勢(shì)，即單純2型糖尿病組或單純慢性牙周炎組的CC基因型頻率（61.4%或67.9%）比健康對(duì)照組（71.6%）低，而慢性牙周炎伴2型糖尿病組的CC基因型頻率最低（54.5%）。類似的趨勢(shì)也可以在等位基因頻率上發(fā)現(xiàn)，健康對(duì)照組的C等位基因頻率最高（85.1%），單純2型糖尿病組和單純慢性牙周炎組次之（分別是79.5%和83%），慢性牙周炎伴2型糖尿病組最低（74.1%）。 4組之間的

13、基因型分布初步比較，我們通過(guò)3種模式來(lái)進(jìn)行。首先，在GG vs。GC+CC模式中我們沒有發(fā)現(xiàn)4組之間有顯著差異（x2=6.432，P=0.092），這結(jié)果表明這種模式下沒必要進(jìn)一步作兩組間的多重比較。其次，我們發(fā)現(xiàn)在GG vs。GC vs. CC模式下4組之間有顯著差異（x2=12.859，P=0.045），接著我們?cè)谶@種模式下作了兩組間的多重比較，結(jié)果沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。最后，在CC vs。GC+GG模式中我們發(fā)現(xiàn)4組之間有顯著差異（

14、x2=8.95，P=0.030），進(jìn)一步的多重比較我們?nèi)匀话l(fā)現(xiàn)慢性牙周炎伴2型糖尿病組與健康對(duì)照組之間的P值有顯著性（x2=7.657，P=0.006，OR=0.475，95%CI：0.279-0.808），其它兩組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 4組之間的等位基因頻率初步比較，差異有顯著性（x2=10.78，P=0.013）。進(jìn)一步作兩組間的多重比較，我們還是在慢性牙周炎伴2型糖尿病組與健康對(duì)照組之間發(fā)現(xiàn)顯著性差異（x2=9.152

15、，P=0.002，OR=0.502，95%CI：0.319-0.788），其它兩組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 以上基因型分布和等位基因頻率的分析結(jié)果似乎表明，IL-6-572位點(diǎn)的CC基因型和C等位基因可能是慢性牙周炎伴2型糖尿病的保護(hù)因素。然而，調(diào)整了年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙和壓力等危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析不支持CC基因型是慢性牙周炎伴2型糖尿病的一個(gè)保護(hù)因素（B=-0.648，W=3.591，P=0.058，OR=

16、0.523，95%CI：0.268-1.022）。 牙周炎的最終結(jié)局就是失牙。盡管缺牙的原因很多，但牙周炎畢竟是成人缺牙的主要原因。我們首先分析了組間缺牙數(shù)（不分基因型）發(fā)現(xiàn)，慢性牙周炎伴2型糖尿病組和其它3組相比（健康對(duì)照組、單純2型糖尿病組和單純慢性牙周炎組）都有顯著差異（F分別是2.820、2.407和1.739，每個(gè)P<0.001）。 研究結(jié)論： 1.IL-6-572 C等位基因可能是慢性牙周炎伴2型糖尿

17、病的一個(gè)保護(hù)因素。這結(jié)論需要在其它人群進(jìn)一步驗(yàn)證。 2.含IL-6-572 G基因型的牙周炎患者可能會(huì)失去更多的牙，這結(jié)論需要進(jìn)一步驗(yàn)證。 3.慢性牙周炎患者失牙比普通人多，如果同時(shí)患有2型糖尿病，則可能失去更多的牙；2型糖尿病患者只要不患上牙周炎，其失牙數(shù)和普通人沒明顯區(qū)別，一旦合并有慢性牙周炎，其失牙數(shù)不但多于普通人，而且比單純慢性牙周炎患者還多。2型糖尿病患者加強(qiáng)口腔護(hù)理，預(yù)防牙周炎發(fā)生有重要的意義。 4.