版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是有包膜的下鏈RNA病毒,全球約1.7億人口感染HCV,我國的感染人數(shù)高達3000-6000萬.HCV感染后導致急性和慢性肝炎,約20﹪發(fā)展為肝硬化,并與肝癌的發(fā)生密切相關.HCV只能感染人和黑猩猩等靈長類動物,目前缺乏合適的動物模型和穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)系統(tǒng),所以對病毒生活周期、致病機制及新的抗病毒治療方案的評價等進展緩慢.一、人LDLR分子真核表達載體的構建.從能感染HCV的人肝癌
2、細胞系HepG2中提取總RNA,逆轉錄得到cDNA,然后用人LDLR(hLDLR)基因的特異引物分兩段進行PCR擴增,得到基因片段hLDLR1和hLDLR2.將目的基因hLDLR1和hLDLR2分別經(jīng)用HindⅢ、BalⅡ和BalⅡ、XbaⅠ雙酶切后回收酶切片段,將兩片段共同插入真核表達載pcDNA3的HindⅢ和XbaⅠ酶切位點之間,構建成含全長hLDLR基因的真核表達載體.二、轉染細胞陽性克隆的篩選及鑒定.將hLDLR真核表達載體p
3、cDNA3-hLDLR和該室已構建的小鼠白蛋白啟動子調控的人CD81(hCD81)和人Sip-L(hSip-L)的真核表達載體pcDNA3-AlbEP-hCD81、pcDNA3-AlbEP-hSip-L分別轉染小鼠肝癌細胞系Hepal-6.G418加壓篩選后,分別在mRNA和蛋白質水平上檢測到穩(wěn)定表達hCD81分子的陽性細胞克隆.由于缺乏hLDLR和hSip-L的單克隆抗體,表達hLDLR和hSip-L的陽性細胞克隆只是在mRNA水平上
4、做了鑒定.三、HCV感染轉基因小鼠肝癌細胞模型的初步建立.用含10﹪HCV陽性血清的培養(yǎng)基與穩(wěn)定表達目的分子的小鼠肝癌細胞Hepal-6在37℃共孵育24h,在染后的第1、3、5、7天分別用套式RT-PCR和間接免疫熒光方法進行HCV RNA和蛋白水平上的檢測.RNA檢測顯示在穩(wěn)定表達hLDLR分子的小鼠肝癌細胞中.該研究證明hLDLR和hCD81等受體導入小鼠肝癌細胞Hepal-6能使HCV感染小鼠肝癌細胞,初步建立了HCV感染的小鼠
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 丙型肝炎病毒感染樹鼩的實驗研究.pdf
- 乙型肝炎病毒感染小鼠模型的建立.pdf
- 丙型肝炎病毒感染自然轉歸分子機制研究.pdf
- 吸毒人群丙型肝炎病毒感染及其危險因素研究.pdf
- 血液透析患者發(fā)生丙型肝炎病毒感染的危險因素研究.pdf
- 丙型肝炎病毒感染慢性化的免疫學機制研究.pdf
- 甲狀腺自身免疫與丙型肝炎病毒感染的相關性研究.pdf
- 丙型肝炎病毒感染引起肝臟病變及肝外表現(xiàn).pdf
- 丙型肝炎病毒感染對腎移植術后影響的臨床研究.pdf
- 維持性血液透析患者丙型肝炎病毒感染的危險因素.pdf
- 隱匿性乙型肝炎病毒感染與肝細胞肝癌關系的研究.pdf
- 自體細胞因子誘導的殺傷細胞治療丙型肝炎病毒感染者的初步研究.pdf
- C57BL-6小鼠乙型肝炎病毒感染模型中細胞因子研究.pdf
- 延邊地區(qū)朝、漢族男性原發(fā)性肝癌與乙型和丙型肝炎病毒感染的關系.pdf
- 丙型肝炎病毒感染的抑制性分子篩選及作用機制研究.pdf
- 丙型肝炎病毒感染者血清中核心抗原的檢出狀況研究.pdf
- 慢性丙型肝炎病毒感染者甲狀腺功能的檢測及意義.pdf
- 淋巴細胞惡性增殖疾病與乙型、丙型肝炎病毒感染的相關性分析.pdf
- LMP基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒感染的相關性研究.pdf
- 膽管癌與乙型和丙型肝炎病毒感染的相關性研究.pdf
評論
0/150
提交評論