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文檔簡介
1、[目的]: 1.探討川芎嗪(TMP)對高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細胞(MCs)增殖及其細胞外基質(zhì)(ECH)含量的影響。 2.觀察TMP對高糖環(huán)境下大鼠MCs產(chǎn)生的ROS含量的影響。 3.觀察TMP對高糖培養(yǎng)下大鼠MCs的基質(zhì)金屬蛋白酶mRNA表達及其活性的影響。 進一步探討TMP對糖尿病腎病(DN)的保護作用及其可能作用機制,為TMP臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 [方法]: 體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜
2、細胞株,分對照組:葡萄糖濃度5.5mM、高糖組:葡萄糖濃度25mM、TMP低劑量組(高糖培養(yǎng)液+200μg/mlTMP)、TMP中劑量組(高糖培養(yǎng)液+500μg/mlTMP)、TMP高劑量組(高糖培養(yǎng)液+1000μg/mlTMP)。分別培養(yǎng)12h、24h、48h。 1.CASY細胞計數(shù)儀計數(shù)細胞存活率; 2.CCK-8法檢測細胞增殖活力: 3.酶聯(lián)免疫(ELISA)法檢測細胞上清液細胞外基質(zhì)ColⅣ及FN的含量。
3、 4.比色法檢測細胞培養(yǎng)液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的變化。 5.明膠酶譜法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的活性。RT-PCR法檢測MMP-2及金屬蛋白酶抑制劑-2(TIMP-2)的mRNA表達。 [結(jié)果]: 1.各實驗組之間細胞存活率無統(tǒng)計學(xué)差異; 2.與對照組比較,高糖組MCs增殖顯著增快,細胞上清中Col
4、Ⅳ、FN含量顯著增多:與高糖組比較,TMP能干預(yù)MCs過度增殖,能抑制ColⅣ、FN分泌。 3.與對照組比較,高糖組MCs上清液SOD、GSH含量F降,MDA含量增加:與高糖組比較,TMP能使MCs上清SOD、GSH含量增加,MDA含量減少。 4.與對照組比較,高糖能抑制基質(zhì)降解酶MMP-2、MMP-9活性及降低MMP-2、增加TIMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達,與高糖組比較,TMP干預(yù)能增加MMP-2、MMP-9的活性
5、及增加MMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達,減少TIMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達,提高了MMP-2/TIMP-2比值。 [結(jié)論]: 1.體外高糖能明顯促進MCs的異常增殖和誘導(dǎo)氧化應(yīng)激,降低的MMP-2、MMF-9的活性及其MMP-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平表達,增加TIMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達,使細胞外基質(zhì)ColⅣ、FN含量增多、降解減少。因此高糖刺激能明顯促進DN的進展。 2.川芎嗪能抑制MCs的異常增殖及氧化應(yīng)
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