高糖對腎小球系膜細(xì)胞P38MAPK和PEDF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎病(DN)是糖尿病的重要微血管并發(fā)癥之一，20％～30％的糖尿病患者罹患此并發(fā)癥。DN早期的病變特點為腎小球基底膜的增厚以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的增生，從而導(dǎo)致腎小球的高濾過和微量白蛋白尿。系膜細(xì)胞在這些病理過程中起著重要作用。盡管嚴(yán)格的控制血糖、血壓以及血脂可以減少DN發(fā)生的危險性，但仍然不能完全阻止糖尿病患者從早期DN進(jìn)展至有明顯腎臟損害的終末期腎病(ESRD)。DN的發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚。目前研究證實，高血糖、血流動

2、力學(xué)、細(xì)胞因子等多種因素參與了DN的發(fā)生。近年來，P38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路在DN發(fā)病中作用日益受到關(guān)注，而色素上皮衍生因子(PEDF)是一種有效的血管生成抑制劑，有研究已經(jīng)證實了視網(wǎng)膜PEDF水平的下降與糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)，但PEDF在DN發(fā)病中的作用及其與P38MAPK信號通路之間的關(guān)系尚不清楚。為進(jìn)一步明確P38MAPK以及PEDF在DN發(fā)病中的作用機(jī)制以及二者的關(guān)系，本研究觀察了高糖刺激后大鼠腎小

3、球系膜細(xì)胞P38MAPK和PEDF表達(dá)，并以P38MAPK特異性抑制劑SB203580作為干預(yù)因素，初步探討了P38MAPK信號通路在DN發(fā)病機(jī)制中的作用以及P38MAPK與PEDF之間的關(guān)系，從而為DN的防治尋求新的理論依據(jù)。 方法：將培養(yǎng)的大鼠HBZY-1腎小球系膜細(xì)胞株分為7組，將高糖作為刺激因子，SB203580作為干預(yù)因素。分別設(shè)正常組(5.6mmol/L)，高糖組(包括三種濃度的葡萄糖：10mmol/L、20mmol

4、/L、30mmol/L)、甘露醇組(25mmol/L甘露醇作為滲透壓對照)、高糖(30mmol/L)加SB203580(10μmol/L)組以及高糖(30mmol/L)加二甲基亞砜(DMSO，10μmol/L)對照組。用細(xì)胞免疫熒光染色檢測各組系膜細(xì)胞磷酸化P38MAPK的表達(dá)，用RealtimeQuantitativePCR法測定各組系膜細(xì)胞P38MAPKmRNA和PEDFmRNA表達(dá)。 結(jié)果：1、正常組系膜細(xì)胞可表達(dá)磷酸化P

5、38MAPK及P38MAPK，PEDF在mRNA的水平上也有表達(dá)。2、高糖組和甘露醇組磷酸化P38MAPK蛋白質(zhì)表達(dá)均增加，P38MAPK在mRNA水平上的表達(dá)均升高，但甘露醇組磷酸化P38MAPK和P38MAPKmRNA表達(dá)較高糖組(30mmol/L)低。3、高糖組(30mmol/L)加入SB203580后，系膜細(xì)胞磷酸化P38MAPK表達(dá)降低，而P38MAPKmRNA的表達(dá)無明顯變化。4、高糖組的系膜細(xì)胞PEDFmRNA的表達(dá)較正常

6、糖組明顯降低，甘露醇組的系膜細(xì)胞PEDFmRNA的表達(dá)較正常糖組無明顯變化。5、SB203580可抑制高糖導(dǎo)致的系膜細(xì)胞PEDFmRNA表達(dá)的降低。 結(jié)論：1、高糖和甘露醇可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠腎系膜細(xì)胞磷酸化P38MAPK以及P38MAPKmRNA的表達(dá)增加，但高糖導(dǎo)致的P38MAPK表達(dá)的增加更明顯。SB203580可抑制高糖所導(dǎo)致的大鼠腎系膜細(xì)胞磷酸化P38MAPK表達(dá)增加，但不能抑制高糖所導(dǎo)致的大鼠腎系膜細(xì)胞P38MAPK