川芎嗪和大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒對高糖刺激大鼠肝星狀細(xì)胞CTGF、TGF-β表達的影響.pdf

1、目的:探討川芎嗪和大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒對高糖刺激大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)的結(jié)締組織生長因子(CTGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)及Ⅰ型膠原表達的作用效果，為在臨床上應(yīng)用川芎嗪治療及預(yù)防肝纖維化提供理論依據(jù)。
　　方法:根據(jù)大鼠CTGF mRNA序列設(shè)計合成3種大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒及1種陰性質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染HSC，轉(zhuǎn)染后于熒光顯微鏡下觀察質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率，應(yīng)用RT-PCR法檢測四種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞CTGF

2、 mRNA的表達水平，篩選出干擾效率最高的一種大鼠CTGFmiRNA質(zhì)粒;將干擾效率最高的大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒及陰性對照質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HSC，經(jīng)殺稻瘟菌素持續(xù)壓力篩選獲得穩(wěn)定表達大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒的大鼠肝星狀細(xì)胞、穩(wěn)定表達陰性質(zhì)粒的大鼠肝星狀細(xì)胞。培養(yǎng)HSC、穩(wěn)定表達大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒的大鼠肝星狀細(xì)胞、穩(wěn)定表達陰性質(zhì)粒的大鼠肝星狀細(xì)胞，高糖及川芎嗪作用后提取細(xì)胞總RNA、總蛋白檢測各組CTGF、TGF-β mR

3、NA表達量及蛋白的表達量。高糖及川芎嗪作用后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液檢測各組Ⅰ型膠原表達量。
　　結(jié)果:
　　應(yīng)用RT-PCR法篩選出干擾效率最高的大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒。獲得穩(wěn)定表達大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒的大鼠肝星狀細(xì)胞及穩(wěn)定表達陰性質(zhì)粒的大鼠肝星狀細(xì)胞。高糖組CTGF mRNA表達量及CTGF蛋白表達量較空白對照組顯著增加(P＜0.01);高糖組TGF-beta mRNA表達量及TGF-beta蛋白表達量較空白對照

4、組顯著增加(P＜0.01);高糖組Ⅰ型膠原表達量較空白對照組顯著增加(P＜0.01)。與高糖組比較，川芎嗪組能明顯下調(diào)CTGF mRNA表達量及CTGF蛋白表達量(P＜0.01);川芎嗪組能明顯下調(diào)TGF-beta mRNA表達量及TGF-beta蛋白表達量(P＜0.01);川芎嗪組能明顯下調(diào)Ⅰ型膠原的表達量(P＜0.01);大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒干擾組能顯著下調(diào)CTGF mRNA表達量及CTGF蛋白表達量(P＜0.01);大鼠C

5、TGF miRNA質(zhì)粒干擾組能顯著下調(diào)TGF-betamRNA表達量及TGF-beta蛋白表達量(P＜0.01);大鼠CTGFmiRNA質(zhì)粒干擾組能顯著下調(diào)Ⅰ型膠原的表達量(P＜0.01)。川芎嗪組與大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒干擾組相比，CTGF mRNA及蛋白的表達量差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);川芎嗪組Ⅰ型膠原的表達量較大鼠CTGFmiRNA質(zhì)粒干擾組低，且差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:由此得出高糖可刺激