高糖對myocardin和SM α-actin在大鼠腎小球系膜細胞中表達的影響.pdf

1、目的：目前，糖尿病性腎病是導致終末期腎病的主要原因之一。在糖尿病性腎病發(fā)病早期，伴隨腎小球高濾過率，早期超濾癥狀的出現(xiàn)將引發(fā)蛋白尿的增加，進而發(fā)展為臨床上的腎病。而腎小球系膜細胞能調節(jié)腎小球毛細血管表面積的大小，其收縮功能的下降是導致糖尿病腎病中超濾現(xiàn)象的原因。因此，對該疾病早期發(fā)病機制的研究將成為預防和治療該疾病的關鍵。由于腎小球系膜細胞可以表達平滑肌特異性的收縮蛋白SMα-actin，我們在實驗初期也證實了系膜細胞中也表達調控平滑肌

2、收縮表型的核轉錄因子myocardin。因而我們用高糖處理體外培養(yǎng)的腎小球系膜細胞，模擬糖尿病患者機體內(nèi)高糖血癥的環(huán)境，在此基礎上研究myocardin及其下游的靶蛋白SMα-actin在大鼠腎小球系膜細胞中表達及功能。
　　 方法：用DMEM低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞系(HBYZ-1)至細胞密度達到70％后，饑餓24h，分別以D-葡萄糖(30 mM)、L-葡萄糖(30 mM)和甘露醇(30 mM)處理24小時后，提取細胞

3、總mRNA用實時定量.聚合酶鏈反應(Real-time Polymerase chain reaction，Real-time PCR)檢測myocardin和SMα-actin的mRNA表達水平，提取細胞總蛋白用蛋白質印跡(western blot)的方法檢測myocardin和SMα-actin的蛋白表達水平以及MAPK信號通路的相關蛋白的激活。
　　 結果：1.高糖可以升高myocardin和SMa-actin的mRNA表

4、達水平，但是降低SMα-actin的蛋白表達水平；2.甘露醇可以升高SMα-actin的mRNA表達水平降低SMα-actin的蛋白表達水平，但對myocardin的mRNA表達水平?jīng)]有作用；3.L-葡萄糖對myoeardin和SMα-actin的表達沒有明顯作用；4.高糖和甘露醇都可以在5 min時激活MAPK信號通路；5.MAPK信號通路被阻斷后，在高糖和甘露醇處理下SMα-actin的蛋白表達水平恢復。
　　 結論：