?；撬釋?duì)糖尿病大鼠心肌損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過建立大鼠2型糖尿病動(dòng)物模型，觀察糖尿病大鼠心肌損傷特點(diǎn)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性蛋白表達(dá)變化，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與糖尿病大鼠心肌損傷的關(guān)系及?；撬釋?duì)糖尿病大鼠心肌損傷的保護(hù)作用，為今后進(jìn)一步探討糖尿病發(fā)病機(jī)制及其防治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:選用140-160g，雄性Wistar大鼠40只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高脂高糖組，糖尿病組和?；撬嶂委熃M。正常對(duì)照組給以普通飼料，糖尿病組和?；撬嶂委熃M給予高脂高糖飼料，喂養(yǎng)5周后按照3

2、5mg/Kg體重行一次性STZ腹腔注射。確定成模，4周后給予?；撬峤o藥組大鼠牛磺酸灌胃200mg/kg.day，共計(jì)5周。之后處死大鼠，處死時(shí)心臟取血離心觀察各項(xiàng)血液指標(biāo)的檢測(cè)，對(duì)大鼠心肌行石蠟切片并進(jìn)行HE染色，觀察各組大鼠心肌組織的病理形態(tài)改變。用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定心肌組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白伴侶Grp78和Grp94的表達(dá)。運(yùn)用RT-PCR方法測(cè)定Grp78mRNA，Grp94mRNA、Caspase3 mRNA、Casepse12

3、mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: 1.?；撬峤o藥組大鼠與糖尿病組大鼠相比，精神狀態(tài)較好。飼養(yǎng)3周以后，糖尿病大鼠和高脂高糖飼養(yǎng)組大鼠體重增加明顯高于正常飼養(yǎng)組大鼠。 2.高脂高糖組大鼠空腹血糖水平比較正常對(duì)照組有升高的趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異。高脂高糖組、糖尿病組的空腹血清胰島素和胰島素抵抗指數(shù)都顯著高于正常對(duì)照組。 3.血清生化檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，糖尿病模型組中的CK和LDH活性明顯升高；牛磺酸給藥組中

4、的CK和LDH活性呈明顯下降趨勢(shì)。 4.通過HE染色觀察心肌組織發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠的心肌組織有明顯的纖維溶解、斷裂及變性，而?；撬峤o藥組能明顯降低心肌組織的上述改變。 5.與正常對(duì)照組比較，糖尿病模型組大鼠心肌中的Grp78和Grp94陽(yáng)性染色顆粒明顯增加，GrP78和Grp94免疫組化陽(yáng)性指數(shù)也明顯升高。與糖尿病模型組比牛磺酸給藥組大鼠能顯著降低Grp78和Grp94陽(yáng)性染色顆粒數(shù)和免疫組化陽(yáng)性指數(shù)。 6.半定量

5、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，糖尿病模型組和?；撬峤o藥組Grp78mRNA、Gw94mRNA、Caspase-12mRNA和Caspase-3 mRNA表達(dá)上調(diào)。糖尿病模型組和內(nèi)參GAPDH光密度積分值之比分別為0.891±0.049、0.823±0.035和0.602±0.020、0.795±0.015，與正常對(duì)照組相比有顯著差異。牛磺酸給藥組和內(nèi)參GAPDH光密度積分值之比分別為0.414±0.065、0.257±0.028、0.258

6、±0.029和0.262±0.015，與正常對(duì)照組相比有顯著差異，與糖尿病模型組相比表達(dá)明顯降低。 結(jié)論: 1.通過高脂高糖飼養(yǎng)和腹腔注射低劑量STZ(35mg/kg)成功建立大鼠2型糖尿病模型，該動(dòng)物并伴有心肌損傷等并發(fā)癥。 2.在持續(xù)高血糖等應(yīng)激狀態(tài)下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了糖尿病心肌損傷，并可能促使了糖尿病心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 3.牛磺酸對(duì)糖尿病心肌損傷起一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)