MLCK、KATP在硫化氫保護(hù)糖尿病大鼠心肌損傷中的作用.pdf

1、目的：研究硫化氫對(duì)糖尿病大鼠心肌細(xì)胞肌球蛋白輕鏈磷酸酯酶（myosin light chain kinase，MLCK）和膜KATP通道基因與蛋白表達(dá)的影響，深入探討硫化氫保護(hù)糖尿病大鼠心肌損傷的分子機(jī)制。
　　方法：健康雄性 SD大鼠40只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（NC組）、糖尿病對(duì)照組（DM組）、NaHS治療組（NaHS+DM組）和 NaHS對(duì)照組（NaHS組）。糖尿病對(duì)照組和硫化氫治療組分別采用鏈脲佐菌素（steptozotoc

2、in, STZ）55 mg/kg腹腔注射制備糖尿病模型，監(jiān)測(cè)血糖持續(xù)在16.7 mmol/L以上者為糖尿病大鼠。測(cè)定左心室動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，從第7周起，NC組和DM組對(duì)照組分別予0.9％NaCl10 ml·kg-1·d-1，NaHS+DM組和NaHS組分別給予NaHS120 mg·kg-1·d-1，連續(xù)給藥6周。造模成功后第7周對(duì)心臟行離體灌流，稱量大鼠體重、心臟濕重，然后計(jì)算心系數(shù)。取心室肌組織，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞MLCK和膜

3、KATP通道組成亞基—磺脲類受體（SUR2）和內(nèi)向電流鉀通道（Kir6.2）的基因與蛋白表達(dá)，應(yīng)用western blotting技術(shù)檢測(cè)Rho/ROCK/MLCK的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）DM組和NaHS+DM組大鼠體重明顯低于正常組，糖尿病癥狀明顯；NaHS+DM組與DM組比較，體重增加，糖尿病病情顯著改善。（2）心功能指標(biāo)的變化：與NC組相比， DM組大鼠左心室內(nèi)壓最大上升/下降速率（± dp/dtmax）、左心室發(fā)展壓

4、（LVDP）均明顯下降（P＜0.01）；而左心室舒張末壓（LVEDP）明顯升高（P＜0.01）。與DM組比較，NaHS+DM組大鼠室內(nèi)壓最大上升/下降速率（± dp/dtmax）、左心室發(fā)展壓（LVDP）明顯升高（P＜0.01， P＜0.05），左心室舒張末壓（LVEDP）明顯下降（P＜0.05）。NaHS組與NC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（3）心系數(shù)的變化：與 NC組相比， DM組和 NaHS+DM組大鼠體重和心臟重量均

5、降低（P＜0.01），心系數(shù)增大（P＜0.01，P＜0.05）；與 DM組比較，NaHS+DM組大鼠體重增加（P＜0.05），心臟重量也增加（P＜0.05），心系數(shù)降低（P＜0.01）。（3）心肌組織MLCK、SUR2、Kir6.2基因表達(dá)的變化：與 NC組比較，DM組 MLCK、SUR2、Kir6.2 mRNA表達(dá)均降低（P＜0.01）；與 DM組比較，NaHS+DM組 MLCK、SUR2、Kir6.2 mRNA表達(dá)增加（P＜0.01

6、）；NC組和NaHS組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。（4）心肌組織ROCK、Rho、MLCK蛋白表達(dá)的變化，與NC組比較DM組ROCK、Rho、MLCK蛋白表達(dá)均降低（P＜0.01）；與 DM組比較， NaHS+DM組 ROCK、Rho、MLCK蛋白表達(dá)均增加（P＜0.01）。
　　結(jié)論：H2S能夠改善糖尿病大鼠左心室功能。硫化氫處理后，糖尿病心肌病大鼠心肌組織 Rho、ROCK和 MLCK蛋白表達(dá)增加，可能是 H2S上調(diào)Rho