絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟損傷的保護(hù)作用.pdf

1、隨著糖尿病患病率的增加,出現(xiàn)糖尿病并發(fā)癥的患者逐年增多。對(duì)于糖尿病并發(fā)癥,人們關(guān)注最多的是血管及神經(jīng)系統(tǒng)病變,而對(duì)于糖尿病合并肝臟病變的研究較少,有研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者中合并肝臟病變者高達(dá)50％以上。肝臟既是胰島素作用的靶器官,又是胰島素抵抗發(fā)生的重要靶器官,因此,肝臟胰島素抵抗機(jī)制的研究對(duì)于加強(qiáng)糖尿病肝病的相關(guān)研究、改善糖尿病病情及病情進(jìn)展、改善糖尿病患者的生活質(zhì)量具有重要意義。
　　絲膠是分子量為10-300kd,由18種氨基酸

2、組成的高分子水溶性蛋白。絲膠的含量約占蠶絲總量的30%,但在繅絲和精煉時(shí)極大部分被除去,造成了極大的浪費(fèi),這些優(yōu)質(zhì)蛋白的有效利用一直是蠶絲界所希望的。近年的研究發(fā)現(xiàn),絲膠具有良好的降血糖作用,但有關(guān)絲膠對(duì)糖尿病肝臟胰島素抵抗的保護(hù)作用,國(guó)內(nèi)、外均未見報(bào)道。本研究以鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)致2型糖尿病大鼠模型為研究對(duì)象,探討絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟損傷的保護(hù)作用,為治療和防治糖尿病并發(fā)癥開辟新途徑。
　　第

3、一部分絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟胰島素信號(hào)通路相關(guān)因子的作用
　　目的:
　　觀察絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟胰島素受體(Insulin Receptor,IR)和胰島素受體底物-2(Insulin Receptor Substrate-2,IRS-2)表達(dá)及肝糖原含量的影響,探討絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟胰島素信號(hào)通路的作用及可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.60只清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組、糖尿病模型組

4、、絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和絲膠預(yù)防組,每組12只。正常對(duì)照組大鼠不做任何處理;糖尿病模型組、絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和絲膠預(yù)防組大鼠以2%STZ(25mg/kg,3d)連續(xù)腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,一周后以血糖(Blood Glucose,BG)≥16.7mmol/L作為成模標(biāo)準(zhǔn)。待模型成功建立后,糖尿病模型組大鼠不做任何處理;絲膠治療組大鼠給予絲膠(2.4g/kg/d)連續(xù)灌胃35天;陽(yáng)性對(duì)照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg/k

5、g/d)連續(xù)灌胃,時(shí)間同絲膠治療組。絲膠預(yù)防組大鼠于2%STZ(25mg/kg)連續(xù)腹腔注射之前給予絲膠(2.4g/kg/d)灌胃35天。
　　2.釆用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)各組大鼠的BG。
　　3.分別采用SP免疫組化法、Western Blotting法檢測(cè)各組大鼠肝臟IR和IRS-2蛋白的表達(dá)。
　　4.釆用RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠肝臟IR、IRS-2 mRNA的表達(dá)。
　　5.釆用過(guò)碘酸-Schiff染色法

6、觀察各組大鼠肝糖原的含量。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠的BG:正常對(duì)照組大鼠的BG為(10.83±2.03)mmol/L,糖尿病模型組大鼠的BG為(29.45±4.82)mmol/L,明顯高正常對(duì)照組大鼠的BG水平(P<0.01);絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組、絲膠預(yù)防組大鼠的BG分別為(13.20±4.09)mmol/L、(13.18±2.30)mmol/L、(10.04±2.29)mmol/L,均明顯低于糖尿病模型組大鼠的B

7、G水平(P<0.01);且絲膠治療組、絲膠預(yù)防組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　2.各組大鼠肝臟IR的表達(dá):IR蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色和(或)棕褐色顆粒,主要位于肝細(xì)胞的胞膜和胞漿。與正常對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠肝臟IR蛋白及mRNA的表達(dá)明顯降低(P<0.01);絲膠治療組、絲膠預(yù)防組與陽(yáng)性對(duì)照組大鼠肝臟IR蛋白及mRNA的表達(dá)較糖尿病模型組大鼠明顯升高(P<0.01),且絲膠治療組和陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯

8、差異(P>0.05)。
　　3.各組大鼠肝臟IRS-2的表達(dá):IRS-2蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色和(或)棕褐色顆粒,主要位于肝細(xì)胞的胞膜和胞漿。正常對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠肝臟IRS-2蛋白及mRNA的表達(dá)明顯降低(P<0.01);絲膠治療組、絲膠預(yù)防組與陽(yáng)性對(duì)照組大鼠肝臟 IRS-2蛋白及mRNA的表達(dá)較糖尿病模型組大鼠明顯升高(P<0.01),且絲膠治療組和陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　4.各組大鼠

9、肝糖原的含量:肝糖原陽(yáng)性結(jié)果表現(xiàn)為紫紅色顆?；蚣?xì)膩顆粒片狀聚集,主要位于肝細(xì)胞胞漿。糖尿病模型組大鼠肝糖原含量明顯低于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01);絲膠治療組、絲膠預(yù)防組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠的肝糖原含量均明顯高于糖尿病模型組大鼠(P<0.01);且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　小結(jié):
　　絲膠可通過(guò)上調(diào)糖尿病肝臟IR和IRS-2的表達(dá),改善糖尿病大鼠的胰島素抵抗,增加肝糖原的儲(chǔ)存,起到降低血糖預(yù)防

10、并發(fā)癥的作用。
　　第二部分絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟相關(guān)炎癥因子的作用
　　目的:
　　探討絲膠對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和肝細(xì)胞核因子-4α(Hepatocyte Nuclear Factor4α,HNF-4α)作用及機(jī)制。
　　方法:
　　1.60只清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組、糖尿病模型組、絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和絲

11、膠預(yù)防組,每組12只。正常對(duì)照組大鼠不做任何處理;糖尿病模型組、絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和絲膠預(yù)防組大鼠以2%STZ(25mg/kg,3d)連續(xù)腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,一周后以血糖(Blood glucose,BG)≥16.7mmol/L作為成模標(biāo)準(zhǔn)。待模型成功建立后,糖尿病模型組大鼠不做任何處理;絲膠治療組大鼠給予絲膠(2.4g/kg/d)連續(xù)灌胃35天;陽(yáng)性對(duì)照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg/kg/d)連續(xù)灌胃,時(shí)間同絲膠

12、治療組。絲膠預(yù)防組大鼠于2%STZ(25mg/kg)連續(xù)腹腔注射之前給予絲膠(2.4g/kg/d)灌胃35天。
　　2.分別采用SP免疫組化法、Western Blotting法檢測(cè)各組大鼠肝臟TNF-α和HNF-4α蛋白的表達(dá)。
　　3.采用RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠肝臟TNF-α和HNF-4αmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠肝臟TNF-α的表達(dá):TNF-α蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色顆粒,主要位于肝

13、細(xì)胞胞漿。與正常對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠肝臟TNF-α蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯升高(P<0.01);絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組與絲膠預(yù)防組大鼠肝臟TNF-α蛋白及mRNA的表達(dá)較糖尿病模型組大鼠明顯降低(P<0.01);且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　2.各組大鼠肝臟 HNF-4α的表達(dá):HNF-4α蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色顆粒狀,主要位于肝細(xì)胞胞核。糖尿病模型組大鼠肝臟HNF-4α蛋白及mRNA的