志賀菌的多重PCR檢測和分子分型研究.pdf

1、背景與目的：志賀菌是引起細菌性痢疾的病原體,后者在我國于1985年歸為乙類傳染病。隨著生活水平的提高和管理的加強,其發(fā)病率不斷下降,但仍遠高于發(fā)達國家。其致病的強弱、耐藥性等與毒力基因有關(guān)。毒力基因的檢測已作為痢疾常規(guī)監(jiān)測項目之一,對它的研究眾多,但多集中在單一PCR,費時費力。分型方法研究眾多,但對各種分型方法的比較甚少,尚沒有標準的分子生物學分型方法。本實驗擬建立一種同時檢測志賀菌主要幾種毒力基因(setl、sen、ipaH、ial

2、、stxl、virA)的多重PCR;比較幾種常用的分型方法,找出一種更適合志賀菌檢測的分子生物學方法,為建立標準的檢測方法提供建議。
　　方法：本實驗選取河南省2001～2007年各痢疾監(jiān)測點分離到的1株痢疾志賀菌、114株福氏志賀菌、11株宋內(nèi)志賀菌作為研究對象,進行毒力基因的多重PCR建立和檢測,并進行重復外回文序列PCR、隨機PCR、質(zhì)粒圖譜分型及細菌全基因組脈沖場凝膠電泳,比較它們在溯源和分型應用中的優(yōu)劣,并對脈沖場凝膠電

3、泳的結(jié)果進行聚類分析。
　　結(jié)果：多重PCR同時檢測與單基因PCR分別檢測6種毒力基因兩種方法具有相近的靈敏度與特異性。毒力基因sen、ipaH、stxl、ial、virA和setlB的陽性率分別為88.70％、99.13%、0、88.70%、92.17%和85.22%,共10種型別。重復外回文序列PCR陽性率96.57%,擴增出0～10條,大小在100～2000bp之間的條帶,共三個型別。隨機PCR可以很好地對志賀菌進行分型,但