抗病毒蛋白Y3與TMV CP的體外互作研究.pdf

1、植物病毒是一種寄生在植物細(xì)胞甚至是細(xì)胞核內(nèi)的專性寄生生物，由它引起的植物病毒病對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有嚴(yán)重危害，人們一直都在尋求防治植物病毒病的方法，目前為止發(fā)現(xiàn)了一些能抑制植物病毒的蛋白，如核糖體失活蛋白，但還未進(jìn)行商品化生產(chǎn)。研究發(fā)現(xiàn)有些抗病毒蛋白與病毒粒子的外殼蛋白（CP）有著關(guān)聯(lián)，了解其作用機(jī)制有助于抗病毒藥劑的研制和抗病毒轉(zhuǎn)基因作物的育種，這些都為日益嚴(yán)重的植物病毒病害提供新的解決策略和防治方法。
　　從食用菌毛頭鬼傘（Copri

2、nus comatus）中提取的一種堿性蛋白Y3對(duì)煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）具有抑制作用，其作用機(jī)理可能是Y3對(duì)CP的體外鈍化作用抑制了病毒蛋白的合成，從而降低病毒的侵染率。為進(jìn)一步驗(yàn)證Y3與CP是如何互作，本試驗(yàn)采用了基因工程的方法，首先通過(guò)克隆分別得到蛋白Y3和CP基因cDNA序列，Y3基因cDNA序列中包括1個(gè)393 bp的ORF，該ORF推測(cè)可編碼1條多肽鏈，含有130個(gè)氨基酸，CP基因cD

3、NA序列中包括一個(gè)480bp的ORF，該最大ORF推測(cè)可編碼1條含159個(gè)氨基酸的多肽鏈，利用ClustalX2.0、DNAMAN6.0軟件比對(duì)獲得的序列和已發(fā)表的蛋白Y3及CP cDNA序列，一致性分別達(dá)到96％和99%；然后將獲得的y3基因cDNA序列與載體pGBKT7連接構(gòu)建誘餌載體，CP基因與載體pGADT7連接構(gòu)建獵物載體，分別轉(zhuǎn)化酵母AH109中培養(yǎng)獲得融合蛋白的表達(dá)，最后將pGBKT7-y3誘餌載體和pGADT7-CP獵物